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当前位置:首页 > 产品中心 > Revvity 均相检测试剂 > Phosphoproteins > HTRF (H) P21 KIT - 50K PTS

概述


p21,也被称为细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂 1 或细胞周期蛋白依赖性激酶相互作用蛋白 1,是一种关键的细胞周期蛋白 - 细胞周期蛋白依赖性激酶(cyclin-CDK)复合物抑制剂,它能与 cyclin-CK2、cyclin-CDK1 以及 cyclin-CDK4/6 结合,并对它们的活性进行调控。p21 与 p53 协同作用,在 DNA 损伤后实现下游细胞周期停滞,其表达受到泛素连接酶驱动的蛋白质降解的负调控。


工作原理
HTRF 人 p21 检测试剂盒原理
HTRF 人 p21 检测试剂盒用于定量检测细胞裂解物中人 p21 的表达水平。与蛋白质印迹法(Western Blot)不同,该检测完全基于微孔板进行,无需凝胶、电泳或转膜步骤。此检测采用两种标记抗体:一种偶联有供体荧光团,另一种偶联有受体荧光团。当细胞裂解物中存在 p21 时,加入这些偶联抗体后,供体荧光团与受体荧光团会靠近,从而产生荧光共振能量转移(FRET)信号。信号强度与样品中目标蛋白的浓度直接成正比,且该检测采用无需洗涤的格式,为评估蛋白表达提供了便捷方法。


human-p21-detection-kit(人 p21 检测试剂盒)


HTRF 人 p21 双板检测方案
双板检测方案包括:先在 96 孔板中培养细胞,然后进行裂解,接着将裂解物转移至 384 孔小体积检测板中,之后再加入人 p21 HTRF 检测试剂。该方案能够监测细胞的活力和汇合度。


human-p21-detection-kit(人 p21 检测试剂盒)


检测验证
Tenovin-1 刺激的 MCF-7 细胞中 p21 的激活情况
将 MCF-7 细胞以每孔 50,000 个细胞的密度接种到 96 孔板中,每孔加入 100μL 完全培养基,在 37°C、5% CO₂条件下孵育过夜。孵育后,用 p53 激活剂 Tenovin-1 以不同浓度处理细胞,并在 37°C、5% CO₂条件下孵育 24 小时。


孵育结束后,移除培养基,加入 50μL 1X 浓度的补充裂解缓冲液 #2,在室温下轻轻振荡裂解 30 分钟。


将 16μL 裂解物转移至白色小体积微孔板中,然后加入 2μL HTRF d2 检测试剂和 2μL HTRF Eu-K 检测试剂。孵育 4 小时后记录 HTRF 信号。


human-p21-detection-kit(人 p21 检测试剂盒)


规格参数


其他规格
应用领域
细胞信号传导
兼容自动化操作

品牌
HTRF
检测方式
HTRF
兼容的裂解缓冲液
裂解缓冲液 1
裂解缓冲液 2
产品类别
试剂盒
样品体积
16μL
运输条件
干冰运输
目标类别
磷酸化蛋白
目标物种

技术原理
时间分辨荧光共振能量转移(TR-FRET)
治疗领域
肿瘤学与炎症
单位规格
500 个检测点


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