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HTRF IRS2 TOTAL KIT - 50K PTS

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概述

胰岛素受体底物（IRS）1 和 2 是胰岛素 / 胰岛素样生长因子 1 受体的主要底物，可介导细胞生长 / 存活和代谢稳态。IRS1 主要存在于脂肪组织中，而 IRS2 则是胰腺 β 细胞和中枢神经系统（CNS）中的主要形式。IRS2 水平降低与糖尿病和神经退行性疾病相关，而 IRS2 的高度过表达会促进肿瘤的迁移和侵袭。这种基于细胞的检测方法可用于测量 IRS2 蛋白水平的调节情况。

工作原理

总 IRS2 检测原理

总 IRS2 检测可量化细胞裂解物中 IRS2 的表达水平。与蛋白质印迹法不同，该检测完全基于微孔板进行，无需凝胶、电泳或转膜步骤。总 IRS2 检测使用两种标记抗体：一种偶联供体荧光团，另一种偶联受体荧光团。两种抗体都对该蛋白上的特定表位具有高度特异性。当细胞提取物中存在 IRS2 时，添加这些偶联物会使供体荧光团与受体荧光团接近，从而产生荧光共振能量转移（FRET）信号。其强度与样品中蛋白质的浓度直接成正比，并提供了一种在无需洗涤的检测格式下评估蛋白质表达的方法。

总 IRS2 双板检测方案

双板方案包括：先在 96 孔板中培养细胞，然后进行裂解，再将裂解物转移至 384 孔小体积检测板，之后添加总 IRS2 均相时间分辨荧光（HTRF）检测试剂。该方案能够监测细胞活力和汇合度。

总 IRS2 单板检测方案

使用 HTRF 试剂检测总 IRS2 可在单个培养、刺激和裂解用板中进行，无需洗涤步骤。这种为高通量筛选（HTS）设计的方案可实现微型化，同时保持稳定的 HTRF 质量。

检测验证

利用葡萄糖和福司柯林上调 INS-1E 大鼠 β 细胞中的 IRS2

将 INS-1E 细胞接种到 24 孔板中，培养 4 天。用不含葡萄糖的克雷布斯 - 林格缓冲液（KRB）进行 1 小时的饥饿处理，然后用葡萄糖 ± 福司柯林（在不含葡萄糖的培养基中稀释）刺激细胞。处理 6 小时后，移除培养基，裂解细胞，并将其转移至 384 孔小体积白色微孔板中，同时添加 HTRF 总 IRS2 检测试剂。 overnight 孵育后记录 HTRF 信号。

利用福司柯林上调 HEK293 人胚肾细胞中的 IRS2 蛋白水平

将 HEK293 细胞以每孔 100,000 个细胞的密度接种到 96 孔板中，在 37°C、5% CO₂条件下孵育 24 小时。用 1 nM 福司柯林处理 30 分钟或 4 小时后，移除培养基，用 50 µL 补充的 1 号裂解缓冲液在室温下轻轻振荡裂解细胞 30 分钟。然后将 16 µL 裂解物转移至 384 孔小体积白色微孔板中，并添加 4 µL HTRF 总 IRS2 检测试剂。overnight 孵育后记录 HTRF 信号。

在 SH-SY5Y 人神经母细胞瘤细胞系中检测 IRS2

将 SH-SY5Y 细胞以两种不同的细胞密度（200 万和 400 万个细胞 / 孔）接种到 6 孔板中，在 37°C、5% CO₂条件下孵育 24 小时。然后移除培养基，用 200 µL 补充的 1 号裂解缓冲液在室温下轻轻振荡裂解细胞 30 分钟。将 16 µL 裂解物转移至 384 孔小体积白色微孔板中，并添加 4 µL HTRF 总 IRS2 检测试剂。overnight 孵育后记录 HTRF 信号。

在 MCF-7 人乳腺癌细胞系中检测 IRS2

将 MCF-7 细胞以每孔 100,000 个细胞的密度接种到 96 孔板中，在 37°C、5% CO₂条件下孵育 24 小时。然后移除培养基，用 50 µL 补充的 1 号裂解缓冲液在室温下轻轻振荡裂解细胞 30 分钟。将 16 µL 裂解物转移至 384 孔小体积白色微孔板中，并添加 4 µL HTRF 总 IRS2 检测试剂。overnight 孵育后记录 HTRF 信号。

简化通路

IRS2 在胰腺 β 细胞中的功能和调节

胰腺 β 细胞中 IRS2 的表达受两种第二信使（葡萄糖和胰高血糖素样肽 - 1）调控。它们可促进转录因子 CERB 的激活，从而增加 IRS2 的表达。IRS2 对胰岛素 / 胰岛素样生长因子 1 的功能性信号传导至关重要，可促进 β 细胞的生长、存活和功能。促炎性脂肪细胞因子、游离脂肪酸和细胞应激会促进 IRS2 降解，并导致自发性 β 细胞凋亡、β 细胞数量减少、胰岛素缺乏，最终引发糖尿病等代谢疾病。

规格

其他规格

应用：细胞信号传导
品牌：HTRF
检测方式：HTRF
分子修饰：总（蛋白）
产品类别：试剂盒
样品体积：16 µL
运输条件：干冰运输
目标类别：磷蛋白
目标物种：人、小鼠
技术：时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET）
治疗领域：代谢 / 糖尿病、神经科学、肿瘤学与炎症
单位规格：50,000 个检测点

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货号：64IRTPEY

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