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HTRF JNK P-T183/Y185 KIT - 10K PTS 磷酸化JNK检测试剂盒-10,000测试

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概述

基于均一且稳定的 HTRF 技术，磷酸化 JNK 检测试剂盒旨在直接在完整细胞中检测和研究 Thr183 与 Tyr185 位点磷酸化的活化 JNK。该试剂盒采用简化的 “混合即读、无需洗涤” 实验流程，可广泛应用于从基础研究到高通量药物筛选的各类场景。

工作原理

磷酸化 JNK（Thr183/Tyr185）检测原理

磷酸化 JNK（Thr183/Tyr185）检测用于测定在 Thr183/Tyr185 位点发生磷酸化的 JNK。与蛋白质印迹法（Western Blot）不同，该检测完全基于微孔板进行，无需凝胶、电泳或转膜步骤。检测过程使用两种标记抗体：一种标记供体荧光团，另一种标记受体荧光团。第一种抗体经筛选可特异性结合蛋白质上的磷酸化基序，第二种抗体则能独立于蛋白质的磷酸化状态对其进行识别。蛋白质发生磷酸化后，会促使形成包含两种标记抗体的免疫复合物，使供体荧光团与受体荧光团相互靠近，从而产生荧光共振能量转移（FRET）信号。该信号强度与样品中磷酸化蛋白质的浓度直接成正比，且能在无需洗涤的检测形式下实现对蛋白质磷酸化状态的评估。

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磷酸化 JNK（Thr183/Tyr185）双板检测方案

双板方案的流程为：先在 96 孔板中培养细胞，裂解后将裂解物转移至 384 孔小体积检测板，再加入磷酸化 JNK（Thr183/Tyr185）HTRF 检测试剂。该方案能够对细胞活力和汇合度进行监测。

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磷酸化 JNK（Thr183/Tyr185）单板检测方案

使用 HTRF 试剂检测磷酸化 JNK（Thr183/Tyr185）可在单个用于培养、刺激和裂解的培养板中完成，无需洗涤步骤。这种为高通量筛选（HTS）设计的方案支持实验微型化操作，同时能保持稳定的 HTRF 检测质量。

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检测验证

HTRF 磷酸化 JNK 检测与蛋白质印迹法的比较

HEK293 细胞培养 2 天后，用 500nM 茴香霉素刺激 30 分钟。细胞裂解后，离心 10 分钟收集可溶性上清。取等量裂解物进行蛋白质印迹法（WB）与 HTRF 的平行对比（100,000 个细胞对应 16 µg 总蛋白）。结果显示，HTRF 磷酸化 JNK 检测与蛋白质印迹法的灵敏度相当：两种技术均需 3,125 个细胞即可检测到信号。

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茴香霉素对 NIH-3T3 细胞的剂量反应实验

将小鼠 NIH-3T3 细胞（100,000 个细胞 / 孔）在 37°C 下用不同浓度的茴香霉素刺激 30 分钟。裂解孵育 30 分钟后，采用磷酸化 JNK 检测的双板方案测定磷酸化 JNK 水平。

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IL-1Ra 对 IL-1β 刺激的 Jurkat 细胞的抑制作用

悬浮 Jurkat 细胞（80,000 个细胞 / 孔）在 37°C 下用不同浓度的 IL-1Ra（IL-1 受体拮抗剂）孵育 10 分钟，随后加入 10nM IL-1β（激动剂）继续孵育 10 分钟。裂解孵育 30 分钟后，采用磷酸化 JNK 检测的单板方案测定 JNK 磷酸化的抑制水平。

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简化通路

磷酸化 JNK（Thr183/Tyr185）检测试剂盒的简化通路

c-Jun N 端激酶（JNKs）也称为应激激活蛋白激酶（SAPKs），是 MAPK 家族的成员。JNKs 可被多种环境应激、炎症细胞因子激活，在某些情况下还可被生长因子和 G 蛋白偶联受体（GPCR）激动剂激活。活化的 JNK 转移至细胞核，对多种转录因子进行磷酸化，如 c-Jun、ATF-2 和 p53。JNK 通路调控多种细胞反应，包括增殖、存活与凋亡、神经发育、炎症、代谢及 DNA 修复。

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规格参数

应用领域：细胞信号传导
品牌：HTRF
检测方式：HTRF
兼容的裂解缓冲液：3 号裂解缓冲液
分子修饰：磷酸化
产品类别：试剂盒
样品体积：16 µL
运输条件：干冰运输
靶标类别：磷酸化蛋白
靶标物种：人、小鼠
技术原理：时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET）
治疗领域：心血管疾病、传染病、代谢 / 糖尿病、非酒精性脂肪性肝炎 / 纤维化、神经科学、肿瘤与炎症
单位规格：10,000 次检测

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货号：64JNKPEH

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