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HTRF MEK1/2 P-S218/222 KIT - 10K PTS 磷酸化丝裂原活化蛋白激酶1/2检测试剂盒-10,000测试

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概述

磷酸化 MEK1/2（Ser218/222）试剂盒用于检测内源性 MEK1/2 蛋白在 Ser218/222 位点的磷酸化水平，适用于研究 MAPK/ERK 通路中的 RAS-RAF-MEK 级联反应。MEK1/2 是一类双特异性丝裂原活化蛋白激酶，由 RAF 催化磷酸化激活，负责对 ERK 进行磷酸化修饰。ERK 是细胞增殖、存活和分化通路中最重要的信号节点及蛋白激酶之一。

工作原理

磷酸化 MEK1/2（Ser218/222）检测原理

磷酸化 MEK1/2（Ser218/222）检测可测定在 Ser218/222 位点发生磷酸化的 MEK1/2。与蛋白质印迹法（Western Blot）不同，该检测为全板基检测，无需凝胶、电泳或转膜步骤。检测采用两种标记抗体：一种偶联供体荧光团，另一种偶联受体荧光团。第一种抗体经筛选可特异性结合蛋白上的磷酸化基序，第二种抗体则能识别该蛋白且不受其磷酸化状态影响。当蛋白质发生磷酸化时，两种标记抗体形成免疫复合物，使供体荧光团与受体荧光团靠近，从而产生荧光共振能量转移（FRET）信号。信号强度与样品中磷酸化蛋白的浓度直接成正比，且可在无需洗涤的检测形式下评估蛋白质的磷酸化状态。

phospho-mek1-2-ser218-222-cellular-assay-principle

磷酸化 MEK1/2（Ser218/222）双板检测方案

双板方案流程为：先在 96 孔板中培养细胞，裂解后将裂解物转移至 384 孔低体积检测板，再加入磷酸化 MEK1/2（Ser218/222）HTRF 检测试剂。该方案可监测细胞的活力和汇合度。

phospho-mek1-2-ser218-222-2-plate-assay-protocol

磷酸化 MEK1/2（Ser218/222）单板检测方案

使用 HTRF 试剂检测磷酸化 MEK1/2（Ser218/222）时，可在单个用于培养、刺激和裂解的培养板中完成所有操作，无需洗涤步骤。这种专为高通量筛选（HTS）设计的方案支持实验微型化，同时保持稳定可靠的 HTRF 检测质量。

phospho-mek1-2-ser218-222-1-plate-assay-protocol

检测验证

蛋白质印迹法与 HTRF 检测对比

HeLa 细胞在 T175 培养瓶中于 37°C、5% CO₂条件下培养 2 天，用 2nM EGF 刺激 5 分钟。移除细胞培养基后，加入 3mL 补充的裂解缓冲液，孵育 30 分钟。离心 10 分钟后收集可溶性上清液。取等量裂解物进行蛋白质印迹法（WB）与 HTRF 检测的平行对比。结果显示，HTRF 磷酸化 MEK1/2 检测的灵敏度与蛋白质印迹法相当。

assay-validation-mek1-2-phospho-s218-222-1

PMA 对 NIH 3T3 细胞的剂量反应

将小鼠 NIH 3T3 细胞（25,000 个细胞 / 孔）在 37°C 下用不同浓度的 PMA 刺激 15 分钟。裂解孵育 30 分钟后，采用双板检测方案测定磷酸化 MEK1/2 水平。

assay-validation-mek1-2-phospho-s218-222-2

EGFR 和 RAF 抑制剂对 HeLa 细胞的抑制作用

HeLa 细胞（50,000 个细胞 / 孔）在 37°C 下与不同浓度的两种抑制剂（EGFR 抑制剂厄洛替尼和 RAF 抑制剂 L777,450）孵育 15 分钟。随后加入 0.8nM EGF（激动剂），继续孵育 10 分钟。裂解孵育 30 分钟后，采用磷酸化 MEK1/2 检测及双板方案测定磷酸化 MEK 的抑制水平。

assay-validation-mek1-2-phospho-s218-222-3

规格参数

其他规格

应用领域：细胞信号传导
品牌：HTRF
检测方式：HTRF
兼容裂解缓冲液：1 号裂解缓冲液、3 号裂解缓冲液
分子修饰类型：磷酸化
产品类别：试剂盒
样品体积：16 µL
运输条件：干冰运输
靶标类别：磷酸化蛋白
靶标物种：人、小鼠
技术原理：时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET）
治疗领域：心血管、神经科学、肿瘤与炎症
单位规格：10,000 次检测

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货号：64ME2PEH

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