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HTRF (H) MET TOTAL KIT - 50K PTS

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概述

c-MET，也称为酪氨酸蛋白激酶 MET 或肝细胞生长因子受体（HGFR），是一种由人类 MET 基因编码的具有酪氨酸激酶活性的蛋白质。它作为酪氨酸激酶受体发挥作用，功能涉及伤口愈合、器官发生和胚胎发育。

MET 在上皮细胞中表达，由肝细胞因子 HGF 和 HSF 触发，影响多种通路，如 RAS-MAPK、AKT 和 STAT3 信号通路。

MET 的异常激活与癌症进展相关，会影响肿瘤生长、血管生成以及肿瘤细胞的迁移和侵袭。MET 与肿瘤细胞之间的这种关系存在于多种癌症类型中（肝癌、脑癌、乳腺癌、肾癌等），推测其源于对 MET 及其配体表达调控的劫持，这导致它们过度表达以及 MET 的自分泌激活。

工作原理

总 MET 检测原理

HTRF 总 MET 检测可定量细胞裂解物中 MET 的表达水平。与蛋白质印迹法不同，该检测完全基于微孔板进行，无需凝胶、电泳或转膜步骤。总 MET 检测使用两种标记抗体：一种偶联供体荧光团，另一种偶联受体荧光团。两种抗体都对该蛋白上的特定表位具有高度特异性。当细胞提取物中存在 MET 时，加入这些偶联物会使供体荧光团与受体荧光团靠近，从而产生荧光共振能量转移（FRET）信号。信号强度与样品中蛋白质的浓度直接成正比，且该检测采用无需洗涤的格式，为评估蛋白质表达提供了途径。

总 MET 双板检测方案

双板方案包括：先在 96 孔板中培养细胞，然后进行裂解，再将裂解物转移至小体积检测板（HTRF 384 孔小体积板或 96 孔小体积板）中，之后加入 HTRF 总 MET 检测试剂。该方案能够监测细胞活力和汇合度。

总 MET 单板检测方案

使用 HTRF 试剂检测总 MET 可在单个用于培养、刺激和裂解的板中进行，无需洗涤步骤。这种为高通量筛选（HTS）设计的方案可实现微型化，同时保持稳定的 HTRF 质量。

检测验证

在 HGF 刺激的 A431 细胞中对磷酸化 MET 和总 MET 检测的验证

将 A431 细胞以 10µL 的量接种到 96 孔板中（100,000 个细胞 / 孔），使用完全培养基，在 37ºC、5% CO₂条件下过夜孵育。次日，移除培养基，加入 50µL 完全培养基，在 37ºC、5% CO₂条件下孵育 2 小时。孵育后，用 50µL 不同浓度的人 HGF（用完全培养基稀释）处理细胞 15 分钟，培养条件为 37ºC、5% CO₂。移除培养基后，用 60µL 裂解缓冲液 #2 和磷酸化 - 总蛋白封闭试剂在室温下轻轻振荡 45 分钟裂解细胞。裂解后，取 16µL 裂解物转移至小体积白色微孔板中，然后分别加入 2µL 供体和受体 HTRF 磷酸化 MET（Y1234/1235）或总 MET 检测试剂。孵育过夜后记录 HTRF 信号。

规格

其他规格

应用：细胞信号传导
品牌：HTRF
检测方式：HTRF
兼容的裂解缓冲液：裂解缓冲液 1、裂解缓冲液 2
分子修饰：总（蛋白）
产品类别：试剂盒
样品体积：16 µL
运输条件：干冰运输
靶标类别：磷酸化蛋白
靶标物种：人
技术：时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET）
单位规格：500 个检测点

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货号：64METTPEY

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