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HTRF AMPK P-T172 KIT - 10K PTS 磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶测量试剂盒- 500测试

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概述

5' 腺苷酸激活蛋白激酶（AMPK）被视为 “代谢总开关”。AMPK 可被 CaMKK2 和 LKB1 等激酶通过苏氨酸 172（Thr172）位点的磷酸化激活。激活后，AMPK 会抑制脂肪酸、胆固醇和甘油三酯的合成，激活脂肪酸摄取和 β- 氧化过程，并促进葡萄糖摄取。此外，AMPK 还通过直接磷酸化 ULK1 参与自噬激活。Revvity 基于细胞的均相 HTRF 磷酸化 AMPK（Thr172）试剂盒可对苏氨酸 172 位点磷酸化的 AMPK 活性调节进行定量检测。

工作原理

磷酸化 AMPK（Thr172）检测原理

磷酸化 AMPK（Thr172）检测用于测定 Thr172 位点磷酸化的 AMPK。与蛋白质印迹法（Western Blot）不同，该检测完全基于微孔板进行，无需凝胶、电泳或转膜步骤。磷酸化 AMPK（Thr172）检测使用两种标记抗体：一种标记供体荧光团，另一种标记受体荧光团。第一种抗体经筛选可特异性结合蛋白上的磷酸化基序，第二种抗体则能识别该蛋白且不受其磷酸化状态影响。蛋白质磷酸化会促使两种标记抗体形成免疫复合物，使供体荧光团与受体荧光团靠近，从而产生荧光共振能量转移（FRET）信号。信号强度与样品中磷酸化蛋白的浓度直接成正比，且可在无需洗涤的检测形式下评估蛋白质的磷酸化状态。

phospho-how-it-works-phospho-ampk-thr172-assay-principle

磷酸化 AMPK（Thr172）双板检测方案

双板方案包括：先在 96 孔板中培养细胞，裂解后将裂解物转移至 384 孔低体积检测板，再加入磷酸化 AMPK（Thr172）HTRF 检测试剂。该方案能够监测细胞的活力和汇合度。

phospho-how-it-works-phospho-ampk-thr172-2-plate-assay-protocol

磷酸化 AMPK（Thr172）单板检测方案

使用 HTRF 试剂检测磷酸化 AMPK（Thr172）可在单个用于培养、刺激和裂解的微孔板中进行，无需洗涤步骤。这种专为高通量筛选（HTS）设计的方案支持实验微型化，同时保持稳定的 HTRF 检测质量。

phospho-how-it-works-phospho-ampk-thr172-1-plate-assay-protocol

检测验证

多索吗啡对 HepG2 肝细胞中磷酸化 AMPK 的抑制作用

将 50,000 个人 HepG2 细胞接种到 96 孔板中，在 37°C、5% CO₂条件下孵育 24 小时。用不同浓度的多索吗啡孵育细胞 4 小时后，移除培养基，加入 50 µL 裂解缓冲液，在室温下轻轻振荡裂解细胞 30 分钟。将 16 µL 裂解物转移至 384 孔低体积白色微孔板中，加入 4 µL HTRF 磷酸化 AMPK（Thr172）检测试剂。过夜孵育后记录 HTRF 信号。

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细胞应激对小鼠 C2C12 细胞中 AMPK 磷酸化的影响

将 50,000 或 100,000 个细胞接种到 96 孔板中，在 37°C、5% CO₂条件下孵育 24 小时。用不同浓度的 H₂O₂孵育细胞 10 分钟以诱导细胞应激后，移除培养基，加入 50 µL 裂解缓冲液，在室温下轻轻振荡裂解细胞 30 分钟。将 16 µL 裂解物转移至 384 孔低体积白色微孔板中，加入 4 µL HTRF 磷酸化 AMPK（Thr172）检测试剂。过夜孵育后记录 HTRF 信号，结果清晰显示 AMPK 的 Thr172 位点磷酸化水平升高。

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简化通路

AMPK 简化通路

腺苷酸激活蛋白激酶（AMPK）在调节细胞代谢和代谢激素方面发挥重要作用，其通过 Thr172 位点的磷酸化被激活。AMPK 最初被确定为关键代谢酶乙酰辅酶 A 羧化酶（ACC1 和 ACC2）和 HMG-CoA 还原酶的上游激酶。AMPK 可刺激分解代谢、抑制合成代谢通路，并直接作用于下丘脑以调节食欲。AMPK 对胰岛素合成的调控（尤其是在葡萄糖转运中的作用）使其成为代谢疾病研究的热门靶点。

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规格参数

其他规格

应用领域：细胞信号传导
品牌：HTRF
检测方式：HTRF
兼容裂解缓冲液：1 号裂解缓冲液
分子修饰类型：磷酸化
产品类别：试剂盒
样品体积：16 µL
运输条件：干冰运输
靶标类别：磷酸化蛋白
靶标物种：人、小鼠
技术原理：时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET）
治疗领域：代谢 / 糖尿病、非酒精性脂肪性肝炎 / 纤维化
单位规格：10,000 个检测点

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货号：64MPKPEH

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