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HTRF MEK1 TOTAL KIT - 50K PTS

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品牌： Revvity

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概述

HTRF 总 MEK1 检测试剂盒旨在定量检测总 MEK1（包括磷酸化和非磷酸化形式），以标准化 MEK1 的磷酸化状态。它是研究 MAPK/ERK 通路中 RAS-RAF-MEK 级联反应的理想检测工具。MEK1 是一种双特异性丝裂原活化蛋白激酶，经 RAF 磷酸化后，负责磷酸化 ERK（细胞增殖、存活和分化通路中最重要的信号节点和蛋白激酶之一）。

工作原理

总 MEK1 检测原理

总 MEK1 检测用于定量细胞裂解物中 MEK1 的表达水平。与蛋白质印迹法（Western Blot）不同，该检测完全基于微孔板进行，无需凝胶、电泳或转膜步骤。总 MEK1 检测使用两种标记抗体：一种偶联供体荧光团，另一种偶联受体荧光团。两种抗体均对该蛋白上的特定表位具有高度特异性。当细胞提取物中存在 MEK1 时，添加这些偶联物会使供体荧光团与受体荧光团接近，从而产生 FRET 信号。信号强度与样品中蛋白质的浓度直接成正比，且无需洗涤步骤即可评估蛋白质的表达。

总 MEK1 双板检测方案

双板方案包括：先在 96 孔板中培养细胞，然后裂解细胞，再将裂解物转移到 384 孔小体积检测板中，最后添加总 MEK1 HTRF 检测试剂。该方案能够监测细胞的活力和汇合度。

总 MEK1 单板检测方案

使用 HTRF 试剂检测总 MEK1 可在单个培养板中完成，该培养板同时用于细胞培养、刺激和裂解，无需洗涤步骤。这种为高通量筛选（HTS）设计的方案能够实现微型化，同时保持稳定的 HTRF 检测质量。

检测验证

总 MEK1 检测在多种细胞系上的验证

将人类细胞系（Hela、A431、HEK293、Jurkat）、小鼠细胞系（NIH 3T3）和仓鼠细胞系（CHO-K1）在 T175 培养瓶中于 37°C、5% CO₂条件下培养 2 天。移除细胞培养基后，加入 3mL 补充的 3 号裂解缓冲液，孵育 45 分钟。离心 10 分钟后收集可溶性上清液，取 16µL 细胞裂解物用于检测总 MEK1。其他物种的细胞系尚未经过测试，因此必须逐例进行评估。

用于控制 MEK1 磷酸化状态的总 MEK1 检测

采用磷酸化 MEK1（Ser218/222）和总 MEK1 检测的双板检测方案，用 EGF 激活 Hela 细胞（100,000 个细胞 / 孔）5 分钟。结果显示，经 EGF 刺激后，MEK1 的磷酸化水平呈剂量依赖性增加，而 MEK1 的表达水平保持恒定。

规格

其他规格

应用领域：细胞信号传导
品牌：HTRF
检测方式：HTRF
分子修饰：总量
产品类别：试剂盒
样本体积：16µL
运输条件：干冰运输
靶标类别：磷酸化蛋白
靶标物种：人
技术：时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET）
治疗领域：心血管疾病、神经科学、肿瘤学与炎症
单位规格：50,000 个检测点

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货号：64NE1PEY

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