登录 注册 购物车 13310039714

当前位置:首页 > 产品中心 > Revvity 均相检测试剂 > Phosphoproteins > HTRF EGFR TOTAL KIT - 50K PTS

概述


总 EGFR 细胞检测试剂盒可监测总 EGFR 水平,且可与我们的磷酸化 EGFR 试剂盒配合使用,作为标准化检测工具。表皮生长因子受体(EGFR,也称为 ErbB1 或 HER1)的过表达或过度激活突变与多种癌症相关,如肺癌、结直肠癌、前列腺癌、胶质母细胞瘤等。这使得 EGFR 成为抗癌治疗相关免疫检测的关键靶点。


工作原理
总 EGFR 检测原理
总 EGFR 检测可对细胞裂解物中 EGFR 的表达水平进行定量分析。与蛋白质印迹法(Western Blot)不同,该检测完全基于微孔板进行,无需凝胶、电泳或转膜步骤。总 EGFR 检测使用两种标记抗体:一种偶联供体荧光团,另一种偶联受体荧光团。两种抗体均对该蛋白上的特定表位具有高度特异性。当细胞提取物中存在 EGFR 时,加入这些偶联物会使供体荧光团与受体荧光团接近,从而产生荧光共振能量转移(FRET)信号。其强度与样品中蛋白质的浓度直接成正比,并且可在无需洗涤的检测格式中评估蛋白质的表达。



总 EGFR 双板检测方案
双板方案包括:先在 96 孔板中培养细胞,然后进行裂解;之后将裂解物转移至 384 孔小体积检测板中,再加入总 EGFR 均相时间分辨荧光(HTRF)检测试剂。该方案能够监测细胞活力和汇合度。



总 EGFR 单板检测方案
使用 HTRF 试剂检测总 EGFR 可在单个培养板中完成,该培养板同时用于细胞培养、刺激和裂解。无需洗涤步骤。这种为高通量筛选(HTS)设计的方案可实现微型化,同时保持稳定的 HTRF 检测质量。



检测验证
HTRF 总 EGFR 检测与蛋白质印迹法(WB)的比较
A431 细胞在 T175 培养瓶中于 37°C、5% CO₂条件下培养 48 小时。然后用 100 nM 表皮生长因子(EGF)刺激细胞 10 分钟。移除培养基后,用 3mL 补充裂解缓冲液在室温下裂解细胞 30 分钟。离心 10 分钟后收集可溶性组分。将细胞裂解物在补充裂解缓冲液中进行系列稀释,取 16 µL 各稀释液分别通过蛋白质印迹法和 HTRF 法进行平行分析。使用 HTRF 总 EGFR 检测时,仅需 50 个细胞即可实现最小信号检测,而蛋白质印迹法则需要 780 个细胞才能产生信号。HTRF 总 EGFR 检测的灵敏度至少是蛋白质印迹法的 15 倍,且具有良好的相关性。


使用磷酸化 EGFR(酪氨酸 1068)和总 EGFR 细胞试剂盒测量抑制效果
人表皮样癌 A431 细胞先用不同浓度的西妥昔单抗(一种胞外治疗性抗体)预处理 3 小时,然后用 200 nM EGF 刺激 10 分钟。


使用磷酸化 EGFR(酪氨酸 1068)和总 EGFR 细胞试剂盒测量抑制效果
人胰腺癌 BxPC3 细胞先用不同浓度的 ATCC528(一种胞外单克隆抗体)预处理 30 分钟,然后用 200 nM EGF 刺激 10 分钟。


使用磷酸化 EGFR(酪氨酸 1068)和总 EGFR 细胞试剂盒测量抑制效果
人表皮样癌 A431 细胞先用不同浓度的吉非替尼(一种小分子酪氨酸激酶抑制剂)预处理 3 小时,然后用 200 nM EGF 刺激 10 分钟。


简化通路
EGFR(表皮生长因子受体)信号传导简化通路
EGFR 是一种受体酪氨酸激酶,属于 ErbB 家族。EGFR 配体的结合会促使受体发生同源二聚化或异源二聚化,进而激活 EGFR 的酪氨酸激酶结构域和特定的酪氨酸残基。


磷酸化的酪氨酸残基随后为多种因子提供停靠位点,这些因子会诱导多个信号转导级联反应的下游激活。


从 EGF 受体传递至细胞核的信号会调控多种生物学功能,如细胞增殖、分化、存活、黏附、迁移和血管生成。


导致 EGFR 过表达或过度激活的突变与多种癌症相关,这使得 EGFR 成为抗癌治疗的关键靶点。



规格


其他规格
应用
细胞信号传导
品牌
HTRF
检测方式
HTRF
分子修饰
总(蛋白)
产品类别
试剂盒
样品体积
16 µL
运输条件
干冰运输
靶标类别
磷蛋白
靶标物种

技术
时间分辨荧光共振能量转移(TR-FRET)
治疗领域
肿瘤学与炎症
单位规格
50,000 个检测点


    没有数据
    没有数据
    没有数据