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HTRF HER2 TOTAL KIT - 10K PTS

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概述

总 HER2（人表皮生长因子受体 2）细胞检测试剂盒可监测 HER2 的水平，且可用作磷酸化 HER2 检测试剂盒的归一化检测工具。HER2（即人表皮样受体 2，又称 ErbB2 受体）的表达上调与人类乳腺癌及其他多种癌症相关，如卵巢癌、胃癌、膀胱癌、唾液腺癌和肺癌等，这使得 HER2 成为抗癌治疗的关键靶点。

工作原理

总 HER2 检测原理

总 HER2 检测可对细胞裂解液中 HER2 的表达水平进行定量分析。与蛋白质印迹法（Western Blot）不同，该检测完全基于微孔板开展，无需凝胶、电泳或转膜步骤。总 HER2 检测采用两种标记抗体：一种与供体荧光团偶联，另一种与受体荧光团偶联。两种抗体均对 HER2 蛋白上的特定表位具有高度特异性。当细胞提取物中存在 HER2 时，加入这些抗体偶联物会使供体荧光团与受体荧光团近距离接触，进而产生荧光共振能量转移（FRET）信号。该信号强度与样品中 HER2 蛋白的浓度呈直接正相关，且可通过 “免洗涤” 检测模式评估该蛋白的表达水平。

（标注：phospho-how-it-works-total-her2-cellular-assay-principle）

总 HER2 双板检测方案

双板检测方案的流程为：先在 96 孔板中培养细胞，随后进行裂解；将裂解液转移至 384 孔低体积检测板后，再加入总 HER2 均相时间分辨荧光（HTRF）检测试剂。该方案可实现对细胞活力和汇合度的监测。

（标注：phospho-how-it-works-total-her2-2-plate-assay-protocol）

总 HER2 单板检测方案

使用 HTRF 试剂检测总 HER2 时，可在同一块微孔板中完成细胞培养、刺激和裂解操作，无需洗涤步骤。该方案专为高通量筛选（HTS）设计，既能实现实验微型化，又能保持稳定可靠的 HTRF 检测质量。

（标注：phospho-how-it-works-total-her2-1-plate-assay-protocol）

检测验证

HTRF 总 HER2 检测与蛋白质印迹法（Western Blot）的比较

将人 SKOV3 细胞（卵巢癌细胞系）在 T175 培养瓶中于 37°C 条件下培养至 80% 汇合度。随后用 100nM（纳摩尔每升）表皮生长因子（EGF）刺激细胞 10 分钟。移除培养基后，用 3mL 添加了补充剂的裂解缓冲液在室温下裂解细胞 30 分钟。离心 10 分钟后收集可溶性上清液。用补充裂解缓冲液对细胞裂解液进行系列稀释，取 16μL（微升）各稀释液分别滴加至检测板，通过蛋白质印迹法与 HTRF 法进行平行分析。结果显示，使用 HTRF 总 HER2 检测时，仅需 3000 个细胞即可检测到最低信号；而使用蛋白质印迹法时，需 12500 个细胞才能检测到信号。HTRF 检测的灵敏度至少是蛋白质印迹法的 4 倍。

（标注：assay-validation-her2-total-1）

HTRF 总 HER2 检测在人癌细胞系中的验证

将人癌细胞系（SKOV3、BT474、A431、MCF7）在 T175 培养瓶中于 37°C、5% 二氧化碳（CO₂）条件下培养 2 天。移除细胞培养基后，加入 3mL 3 号补充裂解缓冲液，孵育 45 分钟。离心 10 分钟后收集可溶性上清液。取 16μL 细胞裂解液用于 HER2 检测。尚未对其他物种的细胞系进行测试，因此需根据具体情况逐一评估。（原文中 “the Western Blot” 为冗余表述，已删除）。不同细胞系中获得的信噪比（S/N）差异，与各细胞系中 HER2 受体的数量高度相关（参考文献：Gabott 等人，《生物化学杂志》，2011 年）。

（标注：assay-validation-her2-total-2）

总 HER2 检测用于监测 HER2 的磷酸化状态

采用 HTRF 磷酸化 HER2 和总 HER2 细胞检测的双板检测方案，用表皮生长因子（EGF）激活 SKOV3 细胞（每孔 100000 个细胞），刺激时间为 10 分钟。正如预期结果所示，EGF 刺激可诱导 HER2 磷酸化水平呈剂量依赖性升高，而 HER2 的表达水平保持恒定。

（标注：assay-validation-her2-total-3）

简化通路

HER2 表皮生长因子信号通路

HER2 是一种受体酪氨酸激酶，属于表皮生长因子受体（EGFR）家族中的 ErbB 亚家族。HER2 定位于细胞表面，是目前已知的 EGFR 家族中唯一尚未发现配体的成员。HER2 受体激活后，会诱导其自身酪氨酸 1221/1222（Tyr1221/1222）位点发生自身磷酸化。该磷酸化位点可为多种衔接蛋白、激酶及磷酸酶提供结合位点，进而激活下游多条信号转导通路，其中主要包括 MAPK/ERK/JNK 通路和 PI3K/AKT 通路。HER2/ErbB 受体介导的信号转导可调控多种生物学过程，如细胞增殖、分化、存活、黏附、迁移及血管生成。HER2 的过度激活与癌症相关，这使其成为抗癌治疗的关键靶点。

（标注：phospho-pathway-her2-epidermal-growth-factor-64nr2peg）

规格参数

其他规格

应用领域（Application）：细胞信号传导
品牌（Brand）：HTRF
检测方式（Detection Modality）：HTRF（均相时间分辨荧光）
兼容裂解缓冲液（Lysis Buffer Compatibility）：
- 3 号裂解缓冲液
- 4 号裂解缓冲液
- 5 号裂解缓冲液
分子修饰类型（Molecular Modification）：总蛋白（Total）
产品类别（Product Group）：试剂盒（Kit）
样品体积（Sample Volume）：16μL（微升）
运输条件（Shipping Conditions）：干冰运输
靶标类别（Target Class）：磷酸化蛋白（Phosphoproteins）
靶标物种（Target Species）：人（Human）
技术原理（Technology）：TR-FRET（时间分辨荧光共振能量转移）
治疗领域（Therapeutic Area）：肿瘤学与炎症（Oncology & Inflammation）
单位规格（Unit Size）：10000 个检测点（10,000 assay points）

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货号：64NR2PEH

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