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HTRF HER2 TOTAL KIT - 50K PTS

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概述

总 HER2 细胞检测试剂盒可监测 HER2，并与磷酸化 HER2 试剂盒配合用作归一化检测。HER2（人表皮生长因子受体 2，又称 ErbB2 受体）的上调与人类乳腺癌及其他多种癌症（如卵巢癌、胃癌、膀胱癌、唾液腺癌或肺癌）相关，这使得 HER2 成为抗癌治疗的关键靶点。

工作原理
总 HER2 检测原理
总 HER2 检测可定量细胞裂解物中 HER2 的表达水平。与蛋白质印迹法不同，该检测完全基于微孔板进行，无需凝胶、电泳或转膜步骤。总 HER2 检测使用两种标记抗体：一种偶联供体荧光团，另一种偶联受体荧光团。两种抗体都对该蛋白上的不同表位具有高度特异性。当细胞提取物中存在 HER2 时，添加这些偶联物会使供体荧光团与受体荧光团接近，从而产生 FRET 信号。其强度与样品中蛋白质的浓度直接成正比，并提供了一种在无需洗涤的检测格式中评估蛋白质表达的方法。

总 HER2 双板检测方案
双板方案包括在 96 孔板中培养细胞，裂解后将裂解物转移至 384 孔小体积检测板，然后添加总 HER2 HTRF 检测试剂。该方案能够监测细胞活力和汇合度。

总 HER2 单板检测方案
使用 HTRF 试剂检测总 HER2 可在单个培养、刺激和裂解用板中进行，无需洗涤步骤。这种为高通量筛选（HTS）设计的方案能够实现小型化，同时保持稳定的 HTRF 检测质量。

检测验证
HTRF 总 HER2 检测与蛋白质印迹法的比较
人 SKOV3 细胞在 T175 培养瓶中于 37°C 下培养至 80% 汇合度。然后用 100 nM EGF 刺激细胞 10 分钟。移除培养基后，用 3mL 补充裂解缓冲液裂解细胞，室温孵育 30 分钟。离心 10 分钟后收集可溶性上清液。在补充裂解缓冲液中对细胞裂解物进行系列稀释，取 16 µL 各稀释液，分别通过蛋白质印迹法和 HTRF 法进行平行分析。使用 HTRF 总 HER2 检测时，仅需 3000 个细胞即可实现最小信号检测，而蛋白质印迹法则需要 12,500 个细胞才能产生信号。HTRF 检测的灵敏度至少是蛋白质印迹法的 4 倍。

HTRF 总 HER2 检测在人癌细胞系中的验证
人源细胞系（SKOV3、BT474、A431 和 MCF7）在 T175 培养瓶中于 37°C、5% CO₂条件下培养 2 天。移除细胞培养基后，加入 3mL 补充裂解缓冲液 3，孵育 45 分钟。离心 10 分钟后收集可溶性上清液。使用 16µL 细胞裂解物检测 HER2。尚未测试其他物种的细胞系，因此必须逐案评估。信噪比（S/N）的差异与不同细胞系中存在的 HER2 受体数量密切相关（Gabott 等人，《生物化学杂志》，2011 年）。

用于控制 HER2 磷酸化状态的总 HER2 检测
采用 HTRF 磷酸化 HER2 和总 HER2 细胞检测的双板方案，用 EGF 激活 SKOV3 细胞（100,000 个细胞 / 孔）10 分钟。正如预期的那样，结果显示 EGF 刺激后 HER2 磷酸化呈剂量反应性增加，而 HER2 表达水平保持恒定。

简化通路
HER2 表皮生长因子信号通路
HER2 是一种受体酪氨酸激酶，属于表皮生长因子受体的 ErbB 家族。HER2 存在于细胞表面，是迄今为止唯一未发现配体的 EGFR 家族成员。HER2 受体激活会诱导 HER2 在 Tyr1221/1222 位点发生自身磷酸化，这为多种衔接蛋白、激酶和磷酸酶提供了结合位点，进而诱导多个信号转导通路的下游激活，主要是 MAPK/ERK/JNK 和 PI3K/AKT 通路。HER2/ErbB 受体的信号转导调节多种生物学过程，如细胞增殖、分化、存活、黏附、迁移和血管生成。HER2 的过度激活与癌症相关，这使其成为抗癌治疗的关键靶点。

规格参数

其他规格
应用领域：细胞信号传导
品牌：HTRF
检测方式：HTRF
分子修饰：总蛋白
产品类别：试剂盒
样本体积：16 µL
运输条件：干冰运输
靶标类别：磷酸化蛋白
靶标物种：人
技术：时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET）
治疗领域：肿瘤学与炎症
单位规格：50,000 个检测点

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货号：64NR2PEY

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