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HTRF HER3 TOTAL KIT - 50K PTS

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概述

总 HER3 细胞检测可监测 HER3，并与磷酸化 HER3 试剂盒配合用作归一化检测。HER3（即人表皮生长因子受体 3/ErbB3）的过表达被视为人类乳腺癌预后不良的指标。HER3 与 HER2 的异源二聚化与乳腺癌侵袭性增强相关。研究还发现，HER3 与前列腺癌、胃癌、结肠癌及其他癌症有关。这使得 HER3 成为抗癌治疗的关键靶点。

工作原理

总 HER3 检测原理

总 HER3 检测可定量细胞裂解物中 HER3 的表达水平。与蛋白质印迹法不同，该检测完全基于微孔板，无需凝胶、电泳或转膜步骤。总 HER3 检测使用两种标记抗体：一种偶联供体荧光团，另一种偶联受体荧光团。两种抗体都对该蛋白上的特定表位具有高度特异性。当细胞提取物中存在 HER3 时，添加这些偶联物会使供体荧光团与受体荧光团接近，从而产生 FRET 信号。其强度与样品中蛋白质的浓度直接成正比，并提供了一种在无需洗涤的检测格式中评估蛋白质表达的方法。

总 HER3 双板检测方案

双板方案包括：先在 96 孔板中培养细胞，然后进行裂解，接着将裂解物转移到 384 孔小体积检测板中，之后再添加总 HER3 HTRF 检测试剂。该方案能够监测细胞活力和汇合度。

总 HER3 单板检测方案

使用 HTRF 试剂检测总 HER3 可在单个板中完成，该板可用于细胞培养、刺激和裂解。无需洗涤步骤。这种为高通量筛选（HTS）设计的方案能够实现小型化，同时保持稳定的 HTRF 质量。

检测验证

酪氨酸激酶抑制剂和单克隆抗体对磷酸化 HER3 的抑制作用

培养 100,000 个细胞，然后用不同浓度的抑制剂进行预处理。在 37°C、5% CO₂条件下，对细胞进行或不进行 100 nM HRG Beta1 刺激。完成这些步骤后，移除培养基，用 50µL 裂解缓冲液在室温下轻轻振荡 30 分钟裂解细胞。检测时，将 16µL 裂解物转移到 384 孔白色小体积微孔板中：加入 4µL HTRF 磷酸化 HER3 检测试剂以检测磷酸化 HER3，加入 4µL HTRF 总 HER3 检测试剂以检测总蛋白。孵育过夜后记录 HTRF 信号。

酪氨酸激酶抑制剂拉帕替尼的细胞内抑制作用及通过总 HER3 定量进行的归一化

对人乳腺癌细胞和 SKBR3 细胞用不同浓度的拉帕替尼（一种小分子酪氨酸激酶抑制剂）预处理 30 分钟，然后用 100 nM HRG Beta1 刺激 10 分钟。

单克隆抗体的抑制作用及通过总 HER3 定量进行的归一化

对人乳腺癌 BXPC3 细胞用不同浓度的单克隆抗体 X（mAb-X）或单克隆抗体 Y（mAb-Y）预处理 30 分钟，然后用 100 nM HRG Beta1 刺激 10 分钟。磷酸化水平的变化以总 HER3 为基准进行归一化。两种单克隆抗体均由法国蒙彼利埃 IRCM 的 Thierry Chardès 博士友好提供。

简化通路

HER3 表皮生长因子信号通路

HER3 是一种受体酪氨酸激酶，属于表皮生长因子受体的 ErbB 家族。HER3 存在于细胞表面，是表皮生长因子受体（EGFR）家族中唯一尚未发现配体的成员。HER3 受体激活会诱导 HER3 在 Tyr1289 位点发生自身磷酸化，这为多种衔接蛋白、激酶和磷酸酶提供了结合位点，进而诱导多个信号转导通路的下游激活。HER3/ErbB 受体调控多种生物学过程，如细胞增殖、分化、存活、黏附、迁移和血管生成。HER3 的过度活跃与癌症相关，这使其成为抗癌治疗的关键靶点。HER3 与 HER2 的异源二聚化会导致癌症侵袭性增强。

规格参数

其他规格

应用：细胞信号传导
品牌：HTRF
检测方式：HTRF
分子修饰：总（蛋白）
产品类别：试剂盒
样品体积：16µL
运输条件：干冰运输
目标类别：磷酸化蛋白
目标物种：人类
技术：时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET）
治疗领域：肿瘤学与炎症
单位规格：50,000 个检测点

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货号：64NR3PEY

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