当前位置：首页 > 产品中心 > Revvity 均相检测试剂 > Phosphoproteins > HTRF (H/M) NRF2 TOTAL KIT - 50K PTS

HTRF (H/M) NRF2 TOTAL KIT - 50K PTS

分享给好友

rvty_ls_sds_64NRF2TPEG_US rvty_ls_sds_64NRF2TPEG_UK rvty_ls_sds_64NRF2TPEG_SPA rvty_ls_sds_64NRF2TPEG_ITA rvty_ls_sds_64NRF2TPEG_ELL rvty_ls_sds_64NRF2TPEG_DEU rvty_ls_sds_64NRF2TPEG_FRA

收藏咨询

品牌： Revvity

产品详情
相关解决方案
相关资源
相关视频
相关问答

概述‘’

‘’H‘’TR‘’F‘’ 人 / 小鼠 NRF2 检测试剂盒可监测多种细胞中内源性 NRF2 的表达。

活性氧（ROS）的过量产生会在细胞中引发氧化应激。NRF2 受 KEAP1 调控。在细胞应激状态下，NRF2 发生磷酸化，从而从 KEAP1 蛋白上释放出来。随后，NRF2 转移到细胞核内。Nrf2 转录因子会激活多种细胞保护基因的转录，包括与癌症和神经退行性疾病（NDD）防护相关的 p62SQSTM1。

工作原理

HTRF 人 / 小鼠总 NRF2 检测原理

HTRF 人 / 小鼠总 NRF2 检测可定量细胞裂解物中 NRF2 的表达水平。与蛋白质印迹法（Western Blot）不同，该检测完全基于微孔板进行，无需凝胶、电泳或转膜步骤。人总 NRF2 检测使用两种标记抗体，一种偶联供体荧光团，另一种偶联受体荧光团。两种抗体均对该蛋白上的特定表位具有高度特异性。当细胞提取物中存在 NRF2 时，加入这些偶联物会使供体荧光团与受体荧光团接近，从而产生 FRET 信号。其强度与样品中蛋白质的浓度直接成正比，且无需洗涤步骤即可评估蛋白质的表达水平。

人 / 小鼠总 NRF2 双板检测方案

双板方案包括：先在 96 孔板中培养细胞，然后进行裂解，接着将裂解物转移到 384 孔小体积检测板中，之后再加入人 / 小鼠总 NRF2 HTRF 检测试剂。该方案能够监测细胞活力和汇合度。

人 / 小鼠总 NRF2 单板检测方案

使用 HTRF 试剂检测人 NRF2 可在单个板中完成，该板可用于细胞培养、刺激和裂解。无需洗涤步骤。这种为高通量筛选（HTS）设计的方案能够实现小型化，同时保持稳定的 HTRF 质量。

检测验证

化合物诱导的 NRF2 释放

将 Hep-G2 细胞以 200,000 个 / 孔的密度接种到 96 孔培养处理板中，使用完全培养基，在 37°C、5% CO₂条件下孵育过夜。用不同浓度的 tBHQ、Ki696 和毒胡萝卜素在 37°C、5% CO₂条件下处理细胞 16 小时，然后用 50µl 的 1X 补充裂解缓冲液 #1 在室温下轻轻振荡裂解 30 分钟。

细胞裂解后，将 16µL 裂解物转移到 384 孔小体积白色微孔板中，并加入 4µL HTRF 总 NRF2 检测试剂。在室温下孵育 18 小时后记录 HTRF 信号。

正如预期的那样，这些化合物诱导 NRF2 从 Keap1 上释放，NRF2 信号水平呈剂量依赖性增加，且具有不同的半数有效浓度（EC50）：Ki696 为 38 nM，毒胡萝卜素为 0.3 µM，tBHQ 为 29 µM。

不同人源和鼠源细胞系中 NRF2 水平的评估

将贴壁的人源和鼠源细胞（Hep-G2、HEK-293、HAP1 和 NIH 3T3）以 100,000 或 200,000 个细胞 / 孔的密度接种到 96 孔微孔板中。孵育 24 小时后，用 tBHQ 在 37°C 条件下处理细胞 16 小时，然后用补充裂解缓冲液 #1 在室温下轻轻振荡裂解细胞。接下来，将 16µL 裂解物转移到 384 孔小体积白色微孔板中，然后加入 4µL HTRF 总 NRF2 检测试剂。孵育过夜后记录 HTRF 信号。

HTRF 总 NRF2 检测能有效检测多种细胞模型中表达水平不同的 NRF2 蛋白。

HTRF 总 NRF2 检测的特异性

将 HAP1 细胞和 HAP1 NRF2 敲除细胞（来自 Biolegend）在 T175 培养瓶中使用完全培养基，在 37°C、5% CO₂条件下培养 24 小时。用 3 mL 补充裂解缓冲液 #1 在室温下轻轻振荡裂解细胞 30 分钟，然后将 16µL 裂解物转移到 384 孔小体积白色微孔板中，再加入 4µL HTRF 总 NRF2 检测试剂。在室温下孵育过夜后记录 HTRF 信号。

HAP1 NRF2 敲除细胞未检测到信号，而 HAP1 野生型细胞中检测到信号，这证明该检测对 NRF2 蛋白具有特异性。

HTRF 人总 NRF2 检测与蛋白质印迹法的比较

将 Hep-G2 细胞在 T175 培养瓶中使用完全培养基，在 37°C、5% CO₂条件下培养 24 小时。用 100 µM 的 tBHQ 化合物在 37°C、5% CO₂条件下处理细胞 16 小时，然后用 3 mL 的 1X 补充裂解缓冲液 #1 在室温下轻轻振荡裂解 30 分钟。

用 1X 补充裂解缓冲液 #1 对细胞裂解物进行系列稀释，将 16µL 各稀释液转移到小体积白色微孔板中，然后加入 4µL HTRF（人 / 小鼠）总 NRF2 检测试剂。

取等量裂解物进行 HTRF 检测与蛋白质印迹法的平行比较。

在这些条件下，HTRF 总 NRF2 检测的灵敏度是蛋白质印迹法的 4 倍。

简化通路

NRF2 信号通路

活性氧（ROS）的过量产生会在细胞中引发氧化应激，进而导致多种病理生理状况，尤其是癌症和神经退行性疾病（NDD）。Keap1-Nrf2（Kelch 样 ECH 相关蛋白 1 - 核因子（红细胞衍生 2）样 2）调控通路在保护细胞免受氧化应激和异源物质应激方面发挥核心作用。

NRF2 受 KEAP1 调控，在细胞应激时发生磷酸化，从而从 KEAP1 蛋白上释放。游离的 NRF2 转移到细胞核内。Nrf2 转录因子激活多种细胞保护基因的转录，包括与癌症和神经退行性疾病防护相关的 p62SQSTM1。这两种蛋白是自噬通路的重要调控因子。

规格参数

其他规格

应用领域：细胞信号传导
品牌：HTRF
检测方式：HTRF
裂解缓冲液兼容性：裂解缓冲液 1、裂解缓冲液 2、裂解缓冲液 3、裂解缓冲液 4
分子修饰：总蛋白
产品类别：试剂盒
样品体积：16 µL
运输条件：干冰运输
靶标类别：磷蛋白
靶标物种：人、小鼠
技术：时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET）
单位规格：500 个检测点

没有数据

货号：64NRF2TPEY

一键复制

参考价格 ¥ 545226.97

产品规格

请咨询￥545226.97

参考货期：3-4周

选择数量

当前规格1件起购

加入购物车询价