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HTRF ERK TOTAL KIT - 96 PTS ERK总蛋白检测试剂盒 - 1 x 96测试

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概述

总 ERK1/2 检测试剂盒是磷酸化 ERK 试剂盒中用于 ERK 标准化的理想选择。该试剂盒可与磷酸化 ERK 试剂盒或高级磷酸化 ERK 试剂盒中的缓冲液兼容，因此可使用同一份裂解液，快速便捷地对总蛋白和磷酸化蛋白群体进行分析。

工作原理

总 ERK 检测原理

总 ERK 检测可对细胞裂解液中 ERK 的表达水平进行定量分析。与蛋白质印迹法（Western Blot）不同，该检测完全基于微孔板进行，无需凝胶、电泳或转膜步骤。总 ERK 检测使用两种标记抗体：一种偶联供体荧光团，另一种偶联受体荧光团。两种抗体均对 ERK 蛋白上的特定表位具有高度特异性。当细胞提取物中存在 ERK 时，加入这些偶联抗体后，供体荧光团会与受体荧光团近距离接触，从而产生荧光共振能量转移（FRET）信号。该信号强度与样品中 ERK 蛋白的浓度直接成正比，且在免清洗检测格式下，可用于评估蛋白的表达水平。

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总 ERK 双板检测方案

双板检测方案的流程为：先在 96 孔板中培养细胞，然后进行裂解，再将裂解液转移至 384 孔小体积检测板中，最后加入总 ERK HTRF 检测试剂。该方案能够监测细胞的存活率和融合度。

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总 ERK 单板检测方案

使用 HTRF 试剂检测总 ERK 时，可在同一块微孔板中完成细胞培养、刺激和裂解操作。该方案无需清洗步骤，是专为高通量筛选（HTS）设计的检测方法，可在实现实验微型化的同时，保持稳定可靠的 HTRF 检测质量。

phospho-how-it-works-total-erk-1-plate-assay-protocol

检测验证

总 ERK1/2 检测在多种细胞系中的验证

将人源细胞（HeLa、A431、HEK293、Jurkat）、鼠源细胞（NIH 3T3）和仓鼠细胞（CHO-K1）在 T175 培养瓶中，于 37°C、5% CO₂条件下培养 2 天。移除细胞培养基后，加入 3 mL 补充后的裂解缓冲液 3，孵育 45 分钟。离心 10 分钟后，收集可溶性上清液。取 16 μL 细胞裂解液用于 ERK1/2 检测。目前尚未对其他物种的细胞系进行测试，因此需根据具体情况对这些细胞系进行逐一评估。

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用于控制 ERK1/2 磷酸化的总 ERK 检测

采用磷酸化 ERK1/2 检测和总 ERK1/2 检测的双板方案，用表皮生长因子（EGF）激活 A431 细胞（100,000 个细胞 / 孔），激活时间为 10 分钟。正如预期的那样，结果显示：EGF 刺激后，ERK1/2 的磷酸化水平呈剂量依赖性增加，而 ERK1/2 的表达水平保持恒定。

assay-validation-erk-total-2

简化通路

MAPK/ERK 细胞信号通路

多种参与生长和分化的受体可激活丝裂原活化蛋白激酶 / 细胞外信号调节激酶（MAPK/ERK）信号级联反应。该核心信号转导级联反应可调控多种细胞过程，包括细胞黏附、迁移、凋亡、分化和代谢。MEK1/2 可催化 ERK1/2 在 Tyr204 和 Thr202 位点的磷酸化。作为响应，ERK 会磷酸化数百种细胞质和细胞核底物。MAPK 信号通路的高度复杂性和多样性，使得 ERK 成为生物学中关键的调控因子和重要的信号节点。

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GPCR 信号通路中的 ERK

ERK 调控在 G 蛋白偶联受体（GPCR）信号通路中发挥重要作用，因此是 GPCR 信号通路中一个重要的可检测指标。GPCR 通过 G 蛋白发挥作用，调控多种细胞功能。受到刺激后，这些受体会激活腺苷酸环化酶、磷脂酶 C 等效应分子；这些效应分子不仅会影响环磷酸腺苷（cAMP）、钙离子（Ca²⁺）等第二信使的细胞内浓度，还会介导 ERK1/2 的磷酸化。研究表明，GPCR 也可通过不依赖 G 蛋白但依赖 β- 抑制蛋白的方式介导 ERK1/2 的激活。

规格参数

其他规格参数

应用领域：细胞信号通路研究
品牌：HTRF
检测方式：HTRF
分子修饰类型：总蛋白
产品类别：试剂盒
样品体积：16 μL
运输条件：干冰运输
检测靶点：ERK1/2
靶点类别：磷酸化蛋白
靶点物种：人、小鼠
技术平台：时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET）
治疗领域：代谢 / 糖尿病、非酒精性脂肪性肝炎（NASH）/ 纤维化、神经科学、肿瘤学与炎症、罕见病
单位规格：96 次检测

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货号：64NRKPET

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