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HTRF ERK TOTAL KIT - 50K PTS

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概述

总 ERK1/2 检测试剂盒是 ERK 标准化的理想选择，可与磷酸化 ERK 试剂盒配合使用。它与磷酸化或高级磷酸化 ERK 试剂盒中的缓冲液兼容，因此可使用相同的裂解物快速、简便地分析总蛋白和磷酸化蛋白群体。

工作原理
总 ERK 检测原理
总 ERK 检测可定量细胞裂解物中 ERK 的表达水平。与蛋白质印迹法不同，该检测完全基于微孔板进行，无需凝胶、电泳或转膜步骤。总 ERK 检测使用两种标记抗体：一种偶联供体荧光团，另一种偶联受体荧光团。两种抗体都对蛋白质上的特定表位具有高度特异性。当细胞提取物中存在 ERK 时，添加这些偶联物会使供体荧光团与受体荧光团接近，从而产生 FRET 信号。其强度与样品中蛋白质的浓度直接成正比，并提供了一种在无需洗涤的检测形式下评估蛋白质表达的方法。

总 ERK 双板检测方案
双板方案包括在 96 孔板中培养细胞，裂解后将裂解物转移到 384 孔小体积检测板中，然后添加总 ERK HTRF 检测试剂。该方案能够监测细胞活力和汇合度。

总 ERK 单板检测方案
使用 HTRF 试剂检测总 ERK 可在单个板中进行，该板可用于细胞培养、刺激和裂解。无需洗涤步骤。这种为高通量筛选（HTS）设计的方案能够实现小型化，同时保持稳定的 HTRF 质量。

检测验证
在多种细胞系上对总 ERK1/2 检测的验证
人源细胞（Hela、A431、HEK293、Jurkat）、鼠源细胞（NIH 3T3）和仓鼠细胞（CHO-K1）在 T175 培养瓶中于 37°C、5% CO₂条件下培养 2 天。去除细胞培养基后，加入 3 mL 补充的裂解缓冲液 3，孵育 45 分钟。离心 10 分钟后收集可溶性上清液。使用 16 µL 细胞裂解物检测 ERK1/2。其他物种的细胞系尚未经过测试，因此必须逐案评估。

总 ERK 检测对 ERK1/2 磷酸化的控制
使用磷酸化 ERK1/2 和总 ERK1/2 检测的双板检测方案，A431 细胞（100,000 个细胞 / 孔）用 EGF 激活 10 分钟。正如预期的那样，结果显示在 EGF 刺激下，ERK1/2 磷酸化呈剂量反应性增加，而 ERK1/2 表达水平保持恒定。

简化通路
MAPK/ERK 细胞信号传导
MAPK/ERK 信号级联由多种参与生长和分化的受体激活。核心信号转导级联调控众多细胞过程，包括黏附、迁移、凋亡、分化和代谢。MEK1/2 催化 ERK1/2 在 Tyr204 和 Thr202 处的磷酸化。作为响应，ERK 磷酸化数百种细胞质和核底物。MAPK 信号传导的广泛复杂性和多样性使 ERK 成为生物学中的关键调节因子和主要信号节点。

GPCR 信号传导中的 ERK
ERK 调节在 GPCR 信号传导中起重要作用，因此是重要的可测量 GPCR 读数。GPCR 通过 G 蛋白发挥作用，调节广泛的细胞功能。受到刺激时，这些受体激活效应器（如腺苷酸环化酶和磷脂酶 C），这些效应器不仅影响细胞内第二信使（如 cAMP 和 Ca²⁺）的浓度，还介导 ERK1/2 磷酸化。研究表明，GPCR 也可以通过不依赖 G 蛋白但依赖 β- 抑制蛋白的方式介导 ERK1/2 激活。

规格

其他规格
应用
细胞信号传导
品牌
HTRF
检测方式
HTRF
分子修饰
总蛋白
产品类别
试剂盒
样品体积
16 µL
运输条件
干冰运输
检测目标
ERK1/2
目标类别
磷酸化蛋白
目标物种
人
小鼠
技术
时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET）
治疗领域
代谢 / 糖尿病
非酒精性脂肪性肝炎 / 纤维化
神经科学
肿瘤学与炎症
罕见病
单位规格
50,000 个检测点

没有数据

货号：64NRKPEY

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