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HTRF STAT3 TOTAL KIT - 50K PTS

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概述

Total STAT3 细胞检测试剂盒旨在监测 STAT3 的表达水平，无论其处于磷酸化还是非磷酸化状态。该试剂盒与我们的磷酸化 STAT3 试剂盒兼容，能够从单个样本中同时分析磷酸化蛋白和总蛋白，从而更好地解读 JAK/STAT 信号通路。

工作原理

Total-STAT3 检测原理

Total-STAT3 检测可定量细胞裂解物中 STAT3 的表达水平。与蛋白质印迹法（Western Blot）不同，该检测完全基于微孔板进行，无需凝胶、电泳或转膜步骤。Total-STAT3 检测使用两种标记抗体：一种偶联供体荧光团，另一种偶联受体荧光团。两种抗体都对该蛋白上的特定表位具有高度特异性。当细胞提取物中存在 STAT3 时，加入这些偶联物会使供体荧光团与受体荧光团接近，从而产生 FRET 信号。信号强度与样本中蛋白质的浓度直接成正比，并且无需洗涤步骤即可评估蛋白质的表达。

Total-STAT3 双板检测方案

双板方案包括先在 96 孔板中培养细胞，裂解后将裂解物转移到 384 孔小体积检测板中，再加入 Total-STAT3 HTRF 检测试剂。该方案能够监测细胞的活力和汇合度。

Total-STAT3 单板检测方案

使用 HTRF 试剂检测总 STAT3 可在单个用于培养、刺激和裂解的板中进行，无需洗涤步骤。这种为高通量筛选（HTS）设计的方案能够实现小型化，同时保持稳定的 HTRF 质量。

检测验证

基于 Total-STAT3 检测的 HTRF 与蛋白质印迹法（Western Blot）对比

HEK293 细胞在 T175 培养瓶中于 37°C、5% CO₂ 条件下培养 2 天。移除细胞培养基后，加入 3mL 补充的裂解缓冲液，孵育 45 分钟。离心 10 分钟后收集可溶性上清液。取等量裂解物进行蛋白质印迹法（WB）和 HTRF 的平行对比。150,000 个细胞约相当于 20µg 总蛋白。两种方法显示出相当的灵敏度水平：每种技术均可检测到 1172 个细胞。

Total-STAT3 试剂盒在不同物种细胞系（人、小鼠和仓鼠）中的验证

人源细胞（Hela、A431、HEK293、Jurkat）、鼠源细胞（NIH 3T3）和仓鼠细胞（CHO-K1）在 T175 培养瓶中于 37°C、5% CO₂ 条件下培养 2 天。移除细胞培养基后，加入 3mL 补充的裂解缓冲液 3，孵育 45 分钟。离心 10 分钟后收集可溶性上清液。使用 16µL 细胞裂解物检测 STAT3。

用于检测 STAT3 磷酸化状态的 HTRF 总 STAT3 检测

使用磷酸化 STAT3（Tyr705）和 Total-STAT3 检测的双板方案，用干扰素 α（IFNα）激活 Hela 细胞（100,000 个细胞 / 孔）15 分钟。结果显示，在 IFNα 刺激下，STAT3 磷酸化呈剂量依赖性增加，而 STAT3 的表达水平保持恒定。

简化通路

STAT3 表皮生长因子信号通路

响应细胞因子和生长因子时，STAT3 被受体相关激酶磷酸化，然后形成二聚体并转运到细胞核，在那里作为转录激活因子发挥作用。STAT3 介导多种基因在细胞受刺激后的表达，因此在许多细胞过程（如细胞生长和凋亡）中起着关键作用。白细胞介素 6 家族细胞因子与 gp130 受体结合，会触发 JAK2 对 STAT3 的磷酸化。STAT3 也是其他受体（如受体酪氨酸激酶（EGFR、cmet 等）和 c-src）的靶标。

规格参数

其他规格

应用领域：细胞信号传导
品牌：HTRF
检测方式：HTRF
分子修饰：总蛋白
产品类别：试剂盒
样本体积：16 µL
运输条件：干冰运输
靶标类别：磷酸化蛋白
靶标物种：人、小鼠
技术：时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET）
治疗领域：传染病、非酒精性脂肪性肝炎 / 肝纤维化、神经科学、肿瘤学与炎症、罕见病
单位规格：50,000 个检测点

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货号：64NT3PEY

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