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HTRF TAU TOTAL KIT - 10K PTS Tau蛋白检测试剂盒– 10000 测试点

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概述

总 Tau 蛋白细胞检测法旨在监测 Tau 蛋白（包括磷酸化型和非磷酸化型）的表达水平。该检测法使用与磷酸化 Tau 蛋白检测试剂盒相同的缓冲液，可对同一份样本中的磷酸化蛋白与总蛋白进行分析。

Tau 蛋白（微管相关单位，简称 TAU），又称微管相关蛋白 Tau（简称 MAPT），是一种磷酸蛋白，主要在中枢神经系统的神经元中表达，参与微管的组装与稳定。

Tau 蛋白含有约 85 个潜在磷酸化位点，这些位点可被多种激酶大量磷酸化，如细胞周期蛋白依赖性激酶 5、丝裂原活化蛋白激酶或糖原合成酶激酶 3β（Tau 蛋白的主要激酶）。Tau 蛋白过度磷酸化会导致微管断裂、Tau 蛋白聚集成双螺旋丝或神经原纤维缠结，并最终引发细胞死亡。

Tau 蛋白过度磷酸化与聚集涉及多种神经退行性疾病，如 Tau 蛋白病、帕金森病及阿尔茨海默病。这两种现象与 β 淀粉样蛋白聚集共同构成阿尔茨海默病的主要病理特征。

工作原理

总 Tau 蛋白检测原理

总 Tau 蛋白检测法可对细胞裂解液中 Tau 蛋白的表达水平进行定量分析。与蛋白质印迹法不同，该检测法完全基于微孔板进行，无需凝胶、电泳或转膜步骤。

总 Tau 蛋白检测法使用两种标记抗体：一种偶联供体荧光团，另一种偶联受体荧光团。两种抗体均对 Tau 蛋白上的特定表位具有高度特异性。当细胞提取物中存在 Tau 蛋白时，加入这些偶联抗体后，供体荧光团会与受体荧光团近距离接触，进而产生荧光共振能量转移信号。该信号强度与样本中 Tau 蛋白的浓度直接成正比，且在免清洗检测格式下，可用于评估 Tau 蛋白的表达水平。

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总 Tau 蛋白双板检测方案

双板检测方案的流程为：先在 96 孔板中培养细胞，随后进行裂解，再将裂解液转移至 384 孔小体积检测板中，最后加入总 Tau 蛋白均相时间分辨荧光检测试剂。

该方案可对细胞的存活率与融合度进行监测。

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总 Tau 蛋白单板检测方案

使用均相时间分辨荧光试剂检测总 Tau 蛋白时，可在同一块用于细胞培养、刺激与裂解的微孔板中完成检测，无需清洗步骤。

该方案专为高通量筛选设计，可在实现实验微型化的同时，保持稳定可靠的均相时间分辨荧光检测质量。

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检测验证

不同细胞密度下人 SH-SY5Y 细胞中 Tau 蛋白表达水平的检测

将人 SH-SY5Y 细胞以不同密度接种到 96 孔板中。在 37°C、5% 二氧化碳条件下孵育 24 小时后，移除培养基，加入 50 微升 1 倍浓度的补充裂解缓冲液。在室温下轻柔振荡裂解 30 分钟后，取 16 微升裂解液转移至 384 孔小体积白色微孔板中，并加入 4 微升总 Tau 蛋白均相时间分辨荧光检测试剂。孵育过夜后，记录均相时间分辨荧光信号。

总 Tau 蛋白检测法具有高灵敏度与宽动态范围，可检测每孔 25,000 个细胞（信号噪声比＞5）至 100,000 个人 SH-SY5Y 细胞中的 Tau 蛋白。

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BIO 介导的 GSK3 抑制对人 SH-SY5Y 细胞系中 Tau 蛋白表达及磷酸化的影响评估

将人 SH-SY5Y 细胞以 100,000 个细胞 / 孔的密度接种到 96 孔板中。在 37°C、5% 二氧化碳条件下孵育 24 小时后，用浓度递增的糖原合成酶激酶 3α/β 抑制剂 BIO 处理细胞 1 小时，随后用 100 纳摩尔冈田酸处理 2 小时，再用 100 纳摩尔花萼海绵诱癌素 A 处理 10 分钟。之后移除培养基，加入 50 微升 1 倍浓度的补充裂解缓冲液。在室温下轻柔振荡裂解 30 分钟后，取 16 微升裂解液转移至 384 孔小体积白色微孔板中，并加入 4 微升磷酸化 Tau 蛋白或总 Tau 蛋白均相时间分辨荧光检测试剂。孵育过夜后，记录均相时间分辨荧光信号。

BIO 诱导的糖原合成酶激酶 3α/β 抑制可完全抑制 Tau 蛋白在丝氨酸 422 位点的磷酸化，而在相同实验条件下，Tau 蛋白的表达水平保持稳定。

这些结果表明，均相时间分辨荧光总 Tau 蛋白检测法可检测 Tau 蛋白，且不受其磷酸化状态的影响。

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阿尔茨海默病患者人脑提取物中磷酸化 T181 位点 Tau 蛋白与总 Tau 蛋白的检测

人脑样本取自阿尔茨海默病患者，样本制备参照 Cisbio 技术说明《优化用于组织的均相时间分辨荧光细胞信号检测法》（相关应用说明链接）。

采用二辛可宁酸法对脑提取物中的蛋白质含量进行定量，并在进行系列稀释前将蛋白质浓度调整至 1 毫克 / 毫升。随后，取 16 微升各稀释液转移至小体积白色微孔板中，再加入 4 微升磷酸化 Tau 蛋白或总 Tau 蛋白均相时间分辨荧光检测试剂。孵育过夜后，记录均相时间分辨荧光信号。

均相时间分辨荧光磷酸化 Tau 蛋白检测试剂盒与总 Tau 蛋白检测试剂盒在人脑来源样本中表现出优异的检测性能。

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均相时间分辨荧光总 Tau 蛋白检测法与蛋白质印迹法的比较

将人神经母细胞瘤 SH-SY5Y 细胞接种到含完全培养基的 T175 培养瓶中，在 37°C、5% 二氧化碳条件下孵育 2 天。随后，用 3 毫升 1 号补充裂解缓冲液在室温下轻柔振荡裂解细胞 30 分钟。离心 10 分钟后，收集可溶性上清液。

用补充裂解缓冲液对细胞裂解液进行系列稀释，取 16 微升各稀释液转移至 384 孔小体积白色微孔板中，再加入 4 微升总 Tau 蛋白均相时间分辨荧光检测试剂。取等量裂解液分别用于蛋白质印迹法与均相时间分辨荧光检测法的平行比较。

结果表明，至少在本实验条件下，均相时间分辨荧光总 Tau 蛋白检测法的灵敏度是蛋白质印迹法的 16 倍。

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简化通路

Tau 蛋白在阿尔茨海默病发病通路中的作用

Tau 蛋白在阿尔茨海默病的发病机制中发挥关键作用。它会发生过度磷酸化并聚集形成纤维丝，这些纤维丝还可进一步浓缩形成神经原纤维缠结。Tau 蛋白聚集体可能通过类似朊病毒的方式在细胞间传播，从而加剧病理损伤。调控 Tau 蛋白过度磷酸化并减少其聚集的药物，是可行的治疗方案。

Tau 蛋白的生理功能是促进微管的组装与稳定。目前已发现 Tau 蛋白有 6 种亚型，氨基酸残基数为 352 至 441 个不等，这些亚型由外显子 2、3 和 10 的选择性剪接产生。其中，最长的 Tau 蛋白亚型含有 85 个潜在磷酸化位点，经实验证实的磷酸化位点约占一半。

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规格参数

其他规格参数

应用领域：细胞信号通路研究
品牌：HTRF
检测方式：HTRF
裂解缓冲液兼容性：1 号裂解缓冲液、2 号裂解缓冲液、3 号裂解缓冲液、4 号裂解缓冲液、5 号裂解缓冲液
分子修饰类型：总蛋白
产品类别：试剂盒
样本体积：16 微升
运输条件：干冰运输
靶点类别：磷酸化蛋白
靶点物种：人
技术平台：TR-FRET
治疗领域：神经科学
单位规格：10,000 次检测

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货号：64NTAUPEH

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参考价格 ¥ 172916.60

产品规格

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