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HTRF PDGFR BETA P-Y751 KIT - 50K PTS

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概述

磷酸化 PDGFRβ（Tyr751）检测试剂盒能够定量检测酪氨酸 751 位点磷酸化的血小板衍生生长因子受体 β（PDGFRβ）的调控情况。PDGFRβ 通过 PI3K/AKT 和 Ras/Raf MAPK 通路进行信号传导和交叉对话。这种细胞表面酪氨酸激酶受体可确保特定生长因子的结合，进而激活 MAPK 通路，引发细胞增殖、分化和血管生成。当 PDGFRβ 被激活时，会形成二聚体并发生磷酸化，因此磷酸化 PDGFRβ 检测试剂盒是肿瘤学研究中的重要工具。

工作原理

磷酸化 PDGFRβ（Tyr751）检测原理

磷酸化 PDGFRβ（Tyr751）检测试剂盒用于检测在酪氨酸 751 位点（Tyr751）发生磷酸化的 PDGFRβ。与蛋白质印迹法（Western Blot）不同，该检测完全基于微孔板进行，无需凝胶、电泳或转膜步骤。此检测采用两种标记抗体：一种标记有供体荧光团，另一种标记有受体荧光团。

第一种抗体经筛选可特异性结合蛋白质上的磷酸化基序，第二种抗体则能识别该蛋白质，且不受其磷酸化状态影响。蛋白质磷酸化会促使形成包含两种标记抗体的免疫复合物，使供体荧光团与受体荧光团靠近，从而产生 FRET（荧光共振能量转移）信号。信号强度与样品中磷酸化蛋白质的浓度直接成正比，且无需洗涤步骤即可评估蛋白质的磷酸化状态。

磷酸化 PDGFRβ（Tyr751）双板检测方案

双板方案包括：先在 96 孔板中培养细胞，然后裂解细胞，再将裂解物转移至 384 孔低体积检测板中，最后加入磷酸化 PDGFRβ（Tyr751）HTRF 检测试剂。该方案可用于监测细胞活力和汇合度。

磷酸化 PDGFRβ（Tyr751）单板检测方案

使用 HTRF 试剂检测磷酸化 PDGFRβ（Tyr751）时，可在同一板中完成细胞培养、刺激和裂解。无需洗涤步骤。这种为高通量筛选（HTS）设计的方案能够实现微型化，同时保持稳定的 HTRF 检测质量。

检测验证

经 PDGF 刺激的肝星状细胞 LX2

人源 PDGF 用于诱导人肝星状细胞 LX2 中 PDGFRβ 的磷酸化。将不同细胞密度的 LX2 细胞用不同浓度的人源 PDGF 刺激 5 分钟。用 50μL 添加了补充剂的裂解缓冲液裂解细胞后，取 16μL 裂解物转移至 384 孔低体积白色微孔板中，再加入 4μL HTRF 磷酸化 PDGFRβ 检测试剂。孵育 2 小时后记录 HTRF 信号。磷酸化 PDGFRβ 信号随细胞密度成比例增加。

小鼠 C2C12 细胞中 PDGFRβ 磷酸化的动力学

人源 PDGF 用于诱导小鼠 C2C12 细胞中 PDGFRβ 的磷酸化。将每孔 50,000 个细胞接种后，用不同浓度的人源 PDGF 在不同时间点进行刺激。用 50μL 添加了补充剂的裂解缓冲液裂解细胞后，取 16μL 裂解物转移至 384 孔低体积白色微孔板中，再加入 4μL HTRF 磷酸化 PDGFRβ 检测试剂。孵育 2 小时后记录 HTRF 信号。短至数分钟的优化时间即可诱导受体磷酸化。

磷酸化 PDGFRβ 检测与不同细胞系的兼容性

人源 PDGF 用于诱导小鼠 C2C12 细胞、NIH 3T3 细胞以及人肝星状细胞 LX2 中 PDGFRβ 的磷酸化。将每孔 100,000 个细胞接种后，用 10ng/mL 的人源 PDGF 刺激 5 分钟。用 50μL 添加了补充剂的裂解缓冲液裂解细胞后，取 16μL 裂解物转移至 384 孔低体积白色微孔板中，再加入 4μL HTRF 磷酸化 PDGFRβ 检测试剂。孵育 2 小时后记录 HTRF 信号。

HTRF 磷酸化 PDGFRβ 细胞检测与蛋白质印迹法的比较

将 C2C12 细胞在 T175 培养瓶中于 37°C、5% CO₂条件下培养 48 小时。然后用 PDGF 刺激细胞 5 分钟。移除培养基后，用 3mL 添加了补充剂的裂解缓冲液在室温下裂解细胞 30 分钟。离心 10 分钟后收集可溶性组分。用添加了补充剂的裂解缓冲液对细胞裂解物进行系列稀释，取 16μL 各稀释液分别通过蛋白质印迹法和 HTRF 法进行平行分析。使用 HTRF® 磷酸化 PDGFRβ 检测时，仅需不到 1,250 个细胞即可检测到最低信号，而蛋白质印迹法则需要 20,000 个细胞才能产生信号。HTRF® 检测的灵敏度是蛋白质印迹法的 16 倍。

简化通路

磷酸化 PDGFRβ 简化通路

血小板衍生生长因子受体（PDGFR）是一种跨膜蛋白，具有胞内酪氨酸激酶结构域。PDGFRβ 包含两个不同的多肽亚基，分别命名为 α 和 β，两者均具有酪氨酸激酶活性。配体结合会诱导受体二聚化和自身磷酸化，进而激活 AKT/PI3K 和 MEK/ERK 通路。这些通路参与介导细胞存活、增殖、生长和分化。

规格

其他规格

应用领域：细胞信号传导
品牌：HTRF
检测方式：HTRF
分子修饰：磷酸化
产品类别：试剂盒
样品体积：16μL
运输条件：干冰运输
靶标类别：磷酸化蛋白
靶标物种：人、小鼠
技术：时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET）
治疗领域：心血管疾病、传染病、代谢 / 糖尿病、非酒精性脂肪性肝炎 / 纤维化、肿瘤与炎症、罕见病
单位规格：50,000 个检测点

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货号：64PDGPEY

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