当前位置：首页 > 产品中心 > Revvity 均相检测试剂 > Phosphoproteins > HTRF PLN P-S16 KIT - 500 PTS

HTRF PLN P-S16 KIT - 500 PTS

分享给好友

品牌： Revvity

产品详情
相关解决方案
相关资源
相关视频
相关问答

概述

这款基于细胞的检测试剂盒可检测丝氨酸 16 位点磷酸化的受磷蛋白（PLN）。该磷酸化检测试剂盒与总受磷蛋白检测试剂盒搭配使用，是监测蛋白激酶 A（PKA）响应 G 蛋白偶联受体（GPCR）刺激（如 β2 肾上腺素能受体刺激）后激活情况的理想工具。蛋白激酶 A 可使受磷蛋白的 16 位丝氨酸残基发生磷酸化。

在未磷酸化状态下，受磷蛋白会抑制肌浆网钙 ATP 酶 2a（SERCA2a）—— 后者是调控心肌收缩力的钙泵。蛋白激酶 A 和钙调蛋白依赖性激酶 II（CaMKII）分别诱导受磷蛋白的 16 位丝氨酸和 17 位苏氨酸位点磷酸化，从而解除对肌浆网钙 ATP 酶 2a 的抑制。受磷蛋白的磷酸化状态可调控心脏中该钙泵的活性。

工作原理

磷酸化受磷蛋白（丝氨酸 16 位点）检测原理

磷酸化受磷蛋白（丝氨酸 16 位点）检测可对丝氨酸 16 位点磷酸化的受磷蛋白进行定量。与蛋白质印迹法（Western Blot）不同，该检测为全微孔板检测模式，无需使用凝胶、进行电泳或转膜操作。磷酸化受磷蛋白（丝氨酸 16 位点）检测采用两种标记抗体：一种标记供体荧光团，另一种标记受体荧光团。第一种抗体经筛选可特异性结合蛋白质上的磷酸化基序，第二种抗体则能不依赖蛋白质的磷酸化状态识别该蛋白质。当蛋白质发生磷酸化时，会形成由两种标记抗体共同参与的免疫复合物，使供体荧光团与受体荧光团近距离接触，进而产生荧光共振能量转移（FRET）信号。该信号强度与样本中磷酸化蛋白质的浓度直接成正比，且可通过 “免洗涤” 检测模式评估蛋白质的磷酸化状态。

phospholamban-phospho-s16-assay-principle（图示：磷酸化受磷蛋白（丝氨酸 16 位点）检测原理）

磷酸化受磷蛋白（丝氨酸 16 位点）双板检测方案

双板检测方案的流程为：先在 96 孔板中培养细胞，随后进行裂解；将裂解液转移至 384 孔小体积检测板后，加入磷酸化受磷蛋白（丝氨酸 16 位点）均相时间分辨荧光（HTRF）检测试剂。该方案可实现对细胞存活率和融合度的监测。

phospholamban-phospho-s16-2-plate-assay-protocol（图示：磷酸化受磷蛋白（丝氨酸 16 位点）双板检测方案）

磷酸化受磷蛋白（苏氨酸 17 位点）单板检测方案

使用均相时间分辨荧光（HTRF）试剂检测磷酸化受磷蛋白（丝氨酸 16 位点）时，可在同一块用于细胞培养、刺激和裂解的微孔板中完成检测，无需洗涤步骤。该专为高通量筛选（HTS）设计的方案，能在实现实验微型化的同时，保持稳定可靠的均相时间分辨荧光检测质量。

phospholamban-phospho-s16-1-plate-assay-protocol（图示：磷酸化受磷蛋白（丝氨酸 16 位点）单板检测方案）

检测验证

心脏匀浆中的磷酸化受磷蛋白（丝氨酸 16 位点）检测

采用 Cisbio 裂解缓冲液对自发性高血压大鼠（SHR）心脏样本和京都威斯塔大鼠（WKY）心脏样本进行匀浆处理，离心后收集上清液。对总蛋白进行定量，并使用裂解缓冲液进行平行稀释。取 16 微升裂解液转移至 384 孔小体积白色微孔板，加入 4 微升磷酸化受磷蛋白（丝氨酸 16 位点）均相时间分辨荧光检测试剂。在室温下孵育过夜后，记录均相时间分辨荧光信号。

assay-validation-pln-phospho-s16-1（图示：磷酸化受磷蛋白（丝氨酸 16 位点）检测验证 1）

高血压大鼠心脏裂解液中磷酸化受磷蛋白的对比检测

采用 Cisbio 裂解缓冲液对自发性高血压大鼠（SHR）心脏样本和京都威斯塔大鼠（WKY）心脏样本进行匀浆处理，离心后收集上清液。在总蛋白浓度固定（16.25 微克 / 毫升）的条件下，使用受磷蛋白苏氨酸 17 位点磷酸化检测试剂盒与受磷蛋白丝氨酸 16 位点磷酸化检测试剂盒进行平行对比检测。为实现检测标准化，同时对总受磷蛋白进行检测。取 16 微升裂解液转移至 384 孔小体积白色微孔板，加入 4 微升磷酸化受磷蛋白（丝氨酸 16 位点）检测试剂、磷酸化受磷蛋白（苏氨酸 17 位点）检测试剂或总受磷蛋白检测试剂。在室温下孵育过夜后，记录均相时间分辨荧光信号。数据结果均根据总受磷蛋白表达水平进行标准化处理。

**** t 检验分析，P 值＜0.0001

assay-validation-pln-phospho-s16-2（图示：磷酸化受磷蛋白（丝氨酸 16 位点）检测验证 2）

磷酸化受磷蛋白（丝氨酸 16 位点）均相时间分辨荧光检测与蛋白质印迹法（Western Blot）的比较

将自发性高血压大鼠（SHR）心脏匀浆离心 10 分钟后收集样本。取等量总蛋白，采用蛋白质印迹法与均相时间分辨荧光法进行平行对比检测。将 110 微克 / 毫升的总蛋白作为系列稀释的最高浓度。结果显示，磷酸化受磷蛋白均相时间分辨荧光检测的灵敏度优于蛋白质印迹法：仅需 0.49 微克 / 毫升的总蛋白即可检测到磷酸化信号，远低于蛋白质印迹法所需的 13.3 微克 / 毫升。

assay-validation-pln-phospho-s16-3（图示：磷酸化受磷蛋白（丝氨酸 16 位点）检测与蛋白质印迹法比较验证）

简化通路

受磷蛋白简化信号通路

受磷蛋白（PLN）通过调控心肌肌浆网钙 ATP 酶 2a（SERCA2a），在心力衰竭过程中发挥关键作用。肌浆网钙 ATP 酶 2a 是一种位于肌浆网（SR）膜上的钙泵，激活后可将钙离子转运至肌浆网内。肌浆网钙 ATP 酶 2a 活性不足是心力衰竭的典型特征。未磷酸化的受磷蛋白会抑制肌浆网钙 ATP 酶 2a，而蛋白激酶 A（PKA）介导的受磷蛋白 16 位丝氨酸位点磷酸化，或钙调蛋白依赖性激酶 II（CaMKII）介导的受磷蛋白 17 位苏氨酸位点磷酸化，均可逆转这种抑制作用。受磷蛋白的磷酸化状态可调控该钙泵的活性：受磷蛋白去磷酸化可驱动心肌舒张，磷酸化则可驱动心肌收缩。

受磷蛋白是一种小分子蛋白质，存在于心肌、平滑肌和慢肌纤维骨骼肌中，但其调控作用主要在心肌中被研究。目前对其激活过程的了解尚不充分，但已知其存在两条主要信号通路，可分别导致两个不同位点的磷酸化 ——16 位丝氨酸位点或 17 位苏氨酸位点。β 受体激动剂与受体结合后激活 G 蛋白，G 蛋白进而增强腺苷酸环化酶（AC）活性；腺苷酸环化酶催化环磷酸腺苷（cAMP）生成，环磷酸腺苷再激活蛋白激酶 A。蛋白激酶 A 可磷酸化 L 型钙通道（增加钙离子内流）、蛋白磷酸酶 1（PP1）以及受磷蛋白的 16 位丝氨酸残基。细胞内钙离子浓度升高会激活钙调蛋白依赖性激酶 II，该酶的自身磷酸化状态也受蛋白磷酸酶 1 调控；随后，钙调蛋白依赖性激酶 II 可磷酸化受磷蛋白的 17 位苏氨酸残基。

phospho-pathway-phospholamban-phospho-s16-kit-64pln16peg（图示：磷酸化受磷蛋白（丝氨酸 16 位点）试剂盒信号通路）

规格参数

其他规格参数

应用领域：细胞信号通路研究
品牌：均相时间分辨荧光（HTRF）
检测方式：均相时间分辨荧光（HTRF）
裂解缓冲液兼容性：1 号裂解缓冲液、2 号裂解缓冲液、3 号裂解缓冲液、4 号裂解缓冲液、5 号裂解缓冲液
分子修饰类型：磷酸化
产品类别：试剂盒
样本体积：16 微升
运输条件：干冰运输
靶点类别：磷酸化蛋白
靶点物种：人
技术平台：时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET）
治疗领域：心血管领域
单位规格：500 次检测

没有数据

货号：64PLN16PEG

一键复制

参考价格 ¥ 29723.99

产品规格

请咨询￥29723.99

参考货期：3-4周

选择数量

当前规格1件起购

加入购物车询价