RNA 结合基序蛋白 39(RBM39)是一种前体 mRNA 剪接因子,参与多种生物学过程,如转录调控、选择性剪接和蛋白质翻译。RBM39 的上调通过调控许多肿瘤相关基因的转录、蛋白质翻译和选择性剪接,间接参与肿瘤的生长和进展,其抑制对包括肺癌、乳腺癌和结直肠癌在内的多种癌症具有杀伤作用。基于这些原因,RBM39 蛋白已成为癌症诊断和治疗的新兴靶点。
将 HeLa 细胞在 T175 培养瓶中的完全培养基中培养(37°C、5% CO₂)至汇合状态。
移除培养基后,用 3 mL 补充的 1X 4 号裂解缓冲液在室温下轻轻振荡裂解细胞 30 分钟。
将 NIH/3T3 细胞在 T175 培养瓶中的完全培养基中培养(37°C、5% CO₂)至汇合状态。
移除培养基后,用 3 mL 补充的 1X 4 号裂解缓冲液在室温下轻轻振荡裂解细胞 30 分钟。
用补充的 1X 4 号裂解缓冲液对细胞裂解物进行系列稀释,将 16 µL 纯样品和各稀释液转移至 384 孔小体积微孔板中,然后加入 4 µL HTRF 总 RBM39 检测试剂。过夜记录信号。
HTRF 总 RBM39 检测能够检测小鼠 RBM39,与人类样品相比具有很好的信噪比。
将 HeLa 细胞在 T175 培养瓶中的完全培养基中培养(37°C、5% CO₂)至汇合状态。
移除培养基后,用 3 mL 补充的 1X 4 号裂解缓冲液在室温下轻轻振荡裂解细胞 30 分钟。
用补充的 1X 4 号裂解缓冲液对细胞裂解物进行系列稀释,将 16 µL 纯样品和各稀释液转移至 384 孔小体积微孔板中,然后加入 4 µL HTRF 总 RBM39 检测试剂。过夜记录信号。
将等量的裂解物上样到凝胶中,进行 HTRF 与蛋白质印迹法的平行比较。
在这些条件下,HTRF 总 RBM39 检测的灵敏度至少是蛋白质印迹法的 8 倍。
RNA 结合基序蛋白 39(RBM39)是一种 RNA 结合蛋白,参与转录共调控和 RNA 选择性剪接。最近的研究表明,RBM39 是剪接抑制剂磺酰胺类药物(SPLAMs,例如吲地磺胺)的靶点,这类药物作为分子胶在 RBM39 和 DCAF15 相关 E3 泛素连接酶复合物之间发挥作用。这种结合导致 RBM39 泛素化并被蛋白酶体选择性降解。
RBM39 的缺失会导致异常剪接事件和基因差异表达。这在许多临床前模型中抑制了细胞周期进展并导致肿瘤消退,因为 RBM39 似乎对癌细胞的存活至关重要。这些方面使 RBM39 成为癌症治疗干预的一个有前景的靶点。
- 应用领域:细胞信号传导
- 品牌:HTRF
- 检测方式:HTRF
- 裂解缓冲液兼容性:1 号裂解缓冲液、4 号裂解缓冲液
- 分子修饰:总(蛋白)
- 产品类别:试剂盒
- 样品体积:16 µL
- 运输条件:干冰运输
- 靶标类别:磷蛋白
- 靶标物种:人、小鼠
- 技术:时间分辨荧光共振能量转移(TR-FRET)
- 单位规格:500 个检测点