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HTRF S6RP P-S235/236 KIT - 50K PTS

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概述

磷酸化 S6 核糖体蛋白（Ser235/236）细胞检测试剂盒能够定量检测丝氨酸 235/236 位点磷酸化的 S6 核糖体蛋白。该试剂盒可用于筛选受体激活调节剂以及作用于上游事件的化合物，应用广泛，涵盖炎症 / 免疫学、代谢 / 糖尿病及肿瘤学研究等领域。

工作原理
磷酸化 S6RP（Ser235/236）检测原理
磷酸化 S6RP（Ser235/236）检测用于测量在 Ser235/236 位点发生磷酸化的 S6 核糖体蛋白（S6RP）。与蛋白质印迹法不同，该检测完全基于微孔板进行，无需凝胶、电泳或转膜步骤。此检测采用两种标记抗体：一种标记有供体荧光团，另一种标记有受体荧光团。第一种抗体经筛选可特异性结合蛋白质上的磷酸化基序，第二种抗体则能不依赖于蛋白质的磷酸化状态对其进行识别。蛋白质磷酸化会促使形成包含两种标记抗体的免疫复合物，使供体荧光团与受体荧光团靠近，进而产生 FRET 信号。信号强度与样品中磷酸化蛋白质的浓度直接成正比，且该检测采用无需洗涤的格式，为评估蛋白质的磷酸化状态提供了便利方式。

磷酸化 S6RP（Ser235/236）双板检测方案
双板方案的流程为：先在 96 孔板中培养细胞，待细胞裂解后，将裂解物转移至 384 孔小体积检测板，再加入磷酸化 S6RP（Ser235/236）HTRF 检测试剂。该方案能够监测细胞的活力和汇合度。

磷酸化 S6RP（Ser235/236）单板检测方案
使用 HTRF 试剂检测磷酸化 S6RP 时，可在单个用于培养、刺激和裂解细胞的培养板中完成全部操作，无需洗涤步骤。这种为高通量筛选（HTS）设计的方案能够实现微型化操作，同时保持稳定的 HTRF 检测质量。

检测验证
使用磷酸化 S6RP（Ser235/236）细胞检测试剂盒进行 HTRF 与蛋白质印迹法（WB）的比较
将 HeLa 细胞在 T175 培养瓶中于 37°C、5% CO₂条件下培养 1 天。移除细胞培养基后，加入 3 mL 补充的裂解缓冲液，孵育 30 分钟。离心 10 分钟后，收集可溶性上清液。取等量的裂解物进行蛋白质印迹法与 HTRF 的平行比较。结果显示，HTRF 磷酸化 S6RP 检测的灵敏度优于蛋白质印迹法。

雷帕霉素对小鼠 NIH-3T3 细胞或人 HEK293 细胞的剂量反应
将小鼠 NIH-3T3 细胞或人 HEK293 细胞以不同密度（12,500 至 100,000 个细胞 / 孔）接种到经细胞培养处理的 96 孔板中。血清饥饿过夜后，加入不同浓度的雷帕霉素处理 2 小时，随后用 20% 血清刺激 30 分钟。用 200µL 补充的裂解缓冲液孵育裂解细胞 30 分钟后，采用双板磷酸化 S6RP 检测试剂盒方案对磷酸化 S6RP 进行测量。注意：根据所用细胞系的不同，需对裂解体积进行优化（通常为 50µL 至 200µL）。

简化通路
磷酸化 S6RP 简化通路

核糖体催化蛋白质合成，由小亚基 40S 和大亚基 60S 组成。细胞质 S6 核糖体蛋白（S6RP）是 40S 亚基的组成部分。RPS6 是核糖体中蛋白质激酶的主要底物。多种刺激可诱导其磷酸化，包括生长因子、促肿瘤剂和有丝分裂原。生长停滞时会发生去磷酸化。S6RP 蛋白可能通过选择性翻译特定类别的 mRNA 来参与对细胞生长和增殖的调控。

规格参数

其他规格参数
应用：细胞信号传导
品牌：HTRF
检测方式：HTRF
分子修饰：磷酸化
产品类别：试剂盒
样品体积：16 µL
运输条件：干冰运输
靶标类别：磷蛋白
靶标物种：人、小鼠
技术：时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET）
治疗领域：代谢 / 糖尿病、肿瘤学与炎症
单位规格：50,000 个检测点

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货号：64RP6PEY

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