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HTRF RSK1 P-S380 KIT - 10K PTS

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概述

RSK1（S380 位点磷酸化）细胞检测试剂盒（Phospho-RSK1 (S380) Cellular Kit）旨在通过精简的 “混合即读”（mix-and-read）、免洗涤实验方案，实现对磷酸化 RSK1 蛋白的稳定定量检测。RSK1（核糖体 S6 激酶 α-1）在细胞增殖与分化过程中发挥关键作用，该试剂盒的应用范围广泛，既可用于基础研究，也能满足高通量药物筛选需求，适用于从基础科研到细胞模型药理学问题分析等多种场景。

工作原理

RSK1（S380 位点磷酸化）检测原理

RSK1（S380 位点磷酸化）检测针对丝氨酸 380（Serine 380，S380）位点发生磷酸化的 RSK1 蛋白进行定量。与蛋白质印迹法（Western Blot）不同，该检测为全微孔板检测模式，无需使用凝胶、进行电泳或转膜操作。

检测采用两种标记抗体：一种偶联供体荧光团，另一种偶联受体荧光团。其中，第一种抗体经筛选可特异性结合 RSK1 蛋白上的磷酸化基序（即仅识别 S380 位点磷酸化的 RSK1）；第二种抗体则不依赖蛋白质的磷酸化状态，可特异性识别 RSK1 蛋白本身。当 RSK1 在 S380 位点发生磷酸化时，两种标记抗体会共同结合该蛋白，形成免疫复合物，使供体荧光团与受体荧光团近距离接触，进而产生荧光共振能量转移（FRET）信号。该信号强度与样本中磷酸化 RSK1 蛋白的浓度直接成正比，且可通过 “免洗涤” 检测模式完成对蛋白质磷酸化状态的评估。

rsk1-phospho-s380-assay-principle（图示：RSK1（S380 位点磷酸化）检测原理）

RSK1（S380 位点磷酸化）双板检测方案

双板检测方案的流程为：先在 96 孔板中培养细胞，随后进行细胞裂解；将裂解液转移至 384 孔小体积检测板后，加入 RSK1（S380 位点磷酸化）均相时间分辨荧光（HTRF）检测试剂。该方案可实现对细胞存活率和融合度的实时监测。

rsk1-phospho-s380-assay-protocol-01（图示：RSK1（S380 位点磷酸化）双板检测方案）

RSK1（S380 位点磷酸化）单板检测方案

使用均相时间分辨荧光试剂检测 RSK1（S380 位点磷酸化）时，可在同一块用于细胞培养、刺激和裂解的微孔板中完成检测，无需洗涤步骤。该专为高通量筛选（HTS）设计的方案，能在实现实验微型化的同时，保持稳定可靠的均相时间分辨荧光检测质量。

rsk1-phospho-s380-assay-protocol-02（图示：RSK1（S380 位点磷酸化）单板检测方案）

检测验证

表皮生长因子（EGF）刺激的 A431 细胞中 RSK1 总蛋白与 S380 位点磷酸化 RSK1 的检测

将 A431 细胞（人表皮癌细胞系）以每孔 80,000 个细胞的密度，用 100 微升（µL）完全培养基接种到 96 孔板中，在 37°C、5% 二氧化碳（CO₂）条件下孵育过夜。次日，加入 50 微升不同浓度的表皮生长因子（EGF），在 37°C、5% 二氧化碳条件下处理 5 分钟。移除培养基后，加入 100 微升补充后的 2 号裂解缓冲液，在室温（RT）下轻柔振荡裂解 30 分钟；取 16 微升裂解液转移至小体积白色微孔板，随后加入 2 微升均相时间分辨荧光 D2 检测试剂和 2 微升均相时间分辨荧光 Eu-K 检测试剂。RSK1 总蛋白与 S380 位点磷酸化 RSK1 的检测在独立孔中进行，孵育过夜后记录均相时间分辨荧光信号。

assay-validation-rsk1-phospho-s380（图示：RSK1（S380 位点磷酸化）检测验证结果）

简化通路

RSK1 的功能与调控机制

核糖体 S6 激酶 α-1（RSK1）是丝氨酸 / 苏氨酸激酶，属于 MAP 激酶（促分裂原活化蛋白激酶）与 ERK（细胞外信号调节激酶）信号通路的下游组件，参与转录因子调控、细胞增殖、存活及分化过程。

RSK1 的激活过程分为两步：

初始激活：MAPK1/ERK 激酶磷酸化 RSK1 的苏氨酸 359（Thr359）和丝氨酸 363（Ser363）位点；
进一步激活：RSK1 在丝氨酸 380（Ser380）位点发生自身磷酸化，该磷酸化位点为 PDK1（磷酸肌醇依赖性蛋白激酶 1）的结合提供条件，进而完成 RSK1 的完全激活。

pathway-rsk1-phospho-s380-64rsk1s0peg（图示：RSK1（S380 位点磷酸化）相关信号通路）

规格参数

其他规格参数

应用领域（Application）：细胞信号通路研究
自动化兼容性（Automation Compatible）：是（Yes）
品牌（Brand）：均相时间分辨荧光（HTRF）
检测方式（Detection Modality）：均相时间分辨荧光（HTRF）
裂解缓冲液兼容性（Lysis Buffer Compatibility）：2 号裂解缓冲液
分子修饰类型（Molecular Modification）：磷酸化
产品类别（Product Group）：试剂盒（Kit）
样本体积（Sample Volume）：16 微升（16 µL）
运输条件（Shipping Conditions）：干冰运输（Shipped in Dry Ice）
靶点类别（Target Class）：磷酸化蛋白（Phosphoproteins）
靶点物种（Target Species）：人（Human）、小鼠（Mouse）
技术平台（Technology）：时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET）
治疗领域（Therapeutic Area）：感染性疾病、代谢 / 糖尿病、肿瘤学与炎症、罕见病
单位规格（Unit Size）：10000 次检测（10,000 assay points）

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