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HTRF RSK1 TOTAL KIT - 500 PTS 核糖体 S6 蛋白激酶1 检测试剂盒

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概述

Total RSK1 细胞检测试剂盒（Total RSK1 Cellular Kit）旨在通过简化的 “混合 - 读取”（mix-and-read）免洗涤方案，实现对总 RSK1 蛋白（Total RSK1）的稳定定量检测。RSK1（核糖体 S6 激酶 α-1）在细胞增殖与分化过程中发挥关键作用，该试剂盒的应用范围覆盖基础研究至高通量药物筛选，凭借其多功能性，可适用于基础研究、细胞模型药理学问题分析等多种场景。

工作原理

Total RSK1 检测原理

注：原文中 “针对蛋白质磷酸化基序的特异性结合” 为表述偏差，结合 “总 RSK1 检测” 的核心目标，修正为 “针对 RSK1 蛋白特定序列的特异性结合”。

Total RSK1 检测针对总 RSK1 蛋白（不依赖其磷酸化状态）进行定量。与蛋白质印迹法（Western Blot）不同，该检测为全板基检测，无需使用凝胶、进行电泳或转膜操作。

该检测采用两种标记抗体：一种偶联供体荧光团，另一种偶联受体荧光团。第一种抗体经筛选，可特异性结合 RSK1 蛋白的特定序列；第二种抗体则能不依赖 RSK1 的磷酸化状态对其进行识别。两种抗体与 RSK1 蛋白结合形成免疫复合物，使供体荧光团与受体荧光团近距离接触，从而产生荧光共振能量转移（FRET）信号。该信号强度与样本中总 RSK1 蛋白的浓度直接成正比，为 “免洗涤” 检测模式下评估总 RSK1 蛋白水平提供了有效手段。

（图示标注：phospho-how-it-works-rsk1-total-assay-principle，即 “Total RSK1 检测原理”）

Total RSK1 检测方案

1. 双板检测方案

双板检测方案的流程为：先在 96 孔板中培养细胞，随后进行细胞裂解，再将裂解液转移至 384 孔小体积检测板，最后加入 Total RSK1 HTRF 检测试剂。该方案可实现对细胞活力及汇合度的监测。

（图示标注：phospho-how-it-works-rsk1-total-assay-protocol-01，即 “Total RSK1 双板检测方案”）

2. 单板检测方案

注：原文中 “检测 Ser338 位点磷酸化的 c-RAF” 为标注错误，结合检测目标修正为 “检测总 RSK1”。

使用 HTRF 试剂检测总 RSK1 蛋白，可在单个培养板中完成 —— 该培养板同时用于细胞培养、刺激及裂解，无需洗涤步骤。此专为高通量筛选（HTS）设计的方案，能在实现实验微型化的同时，保持稳定可靠的 HTRF 检测质量。

（图示标注：phospho-how-it-works-rsk1-total-assay-protocol-02，即 “Total RSK1 单板检测方案”）

检测验证

EGF 刺激 A431 细胞后总 RSK1 与磷酸化 RSK1（S380）的检测

将 A431 细胞（人表皮癌细胞系）以每孔 8 万个细胞的密度接种到 96 孔板中，每孔加入 100 微升（µL）完全培养基，在 37°C、5% 二氧化碳（CO₂）条件下孵育过夜。次日，向每孔加入 50 微升梯度浓度的表皮生长因子（EGF），在 37°C、5% 二氧化碳条件下刺激 5 分钟。

移除培养基后，加入 100 微升 2 号补充型裂解缓冲液，在室温（RT）下轻柔振荡裂解细胞 30 分钟。取 16 微升裂解液转移至小体积白色微孔板，随后加入 2 微升 HTRF D2 检测试剂和 2 微升 HTRF Eu-K 检测试剂。总 RSK1 与磷酸化 RSK1（S380）的检测在不同孔中分别进行，孵育过夜后记录 HTRF 信号。

（图示标注：assay-validation-rsk1-total-01，即 “Total RSK1 检测验证 1”）

EGF 刺激 A431 细胞后总 RSK1 与磷酸化 RSK1（T359/S363）的检测

将 A431 细胞以每孔 8 万个细胞的密度接种到 96 孔板中，每孔加入 100 微升完全培养基，在 37°C、5% 二氧化碳条件下孵育过夜。次日，向每孔加入 50 微升梯度浓度的 EGF，在 37°C、5% 二氧化碳条件下刺激 5 分钟。

移除培养基后，加入 100 微升 2 号补充型裂解缓冲液，在室温下轻柔振荡裂解细胞 30 分钟。取 16 微升裂解液转移至小体积白色微孔板，随后加入 2 微升 HTRF D2 检测试剂和 2 微升 HTRF Eu-K 检测试剂。总 RSK1 与磷酸化 RSK1（T359/S363）的检测在不同孔中分别进行，孵育过夜后记录 HTRF 信号。

（图示标注：assay-validation-rsk1-total-02，即 “Total RSK1 检测验证 2”）

简化通路

RSK1 的功能与调控机制

RSK1（核糖体 S6 激酶 α-1）是 MAP 激酶（丝裂原活化蛋白激酶）与 ERK（细胞外信号调节激酶）信号通路的下游组件，作为丝氨酸 / 苏氨酸激酶，参与转录因子调控、细胞增殖、存活及分化过程。

其激活过程分为两步：首先，MAPK1/ERK 激酶磷酸化 RSK1 的 Thr359/Ser363 位点，启动 RSK1 的初始激活；随后，RSK1 发生自身磷酸化（Ser380 位点），该磷酸化可促进 PDK1（3 - 磷酸肌醇依赖性蛋白激酶 1）与 RSK1 结合，进一步完成激活。

（图示标注：phospho-pathway-rsk1-total-64rsk1tpeg，即 “Total RSK1 相关简化通路”）

规格参数

其他规格参数

应用领域：细胞信号传导
自动化兼容性：是（Yes）
品牌：HTRF
检测方式：HTRF（均相时间分辨荧光）
裂解缓冲液兼容性：2 号裂解缓冲液
分子修饰类型：总蛋白（Total）
产品类别：试剂盒
样本体积：16 微升（µL）
运输条件：干冰运输
靶点类别：磷酸化蛋白（注：此处 “磷酸化蛋白” 为产品分类通用标注，实际检测目标为总 RSK1 蛋白）
靶点物种：人、小鼠
技术平台：TR-FRET（时间分辨荧光共振能量转移）
治疗领域：感染性疾病、代谢 / 糖尿病、肿瘤学与炎症、罕见病
单位规格：500 个检测点

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货号：64RSK1TPEG

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