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HTRF P70S6K P-T389 KIT - 50K PTS

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概述

这种基于 HTRF 细胞的检测方法可便捷、准确地定量苏氨酸 389 位点磷酸化的 p70S6K。该试剂盒兼容大多数细胞类型，是筛选和研究对细胞增殖、存活、侵袭、迁移以及胰岛素受体信号传导有生物学影响的化合物的理想工具。其应用领域涵盖肿瘤学、代谢领域（糖尿病、肥胖症、衰老）、心血管疾病和神经退行性疾病。

工作原理
磷酸化 p70S6K（苏氨酸 389）检测原理
磷酸化 p70S6K（苏氨酸 389）检测用于测量苏氨酸 389 位点磷酸化的 p70S6K。与蛋白质印迹法不同，该检测完全基于微孔板进行，无需凝胶、电泳或转膜步骤。磷酸化 p70S6K（苏氨酸 389）检测使用两种标记抗体：一种标记有供体荧光团，另一种标记有受体荧光团。第一种抗体经筛选可特异性结合蛋白质上的磷酸化基序，第二种抗体则能不依赖于蛋白质的磷酸化状态识别该蛋白质。蛋白质磷酸化会促使形成包含两种标记抗体的免疫复合物，使供体荧光团与受体荧光团靠近，从而产生 FRET 信号。信号强度与样品中磷酸化蛋白质的浓度直接成正比，且无需洗涤步骤即可评估蛋白质的磷酸化状态。

磷酸化 p70S6K（苏氨酸 389）双板检测方案
双板方案包括：先在 96 孔板中培养细胞，裂解后将裂解物转移至 384 孔小体积检测板中，再加入磷酸化 p70S6K（苏氨酸 389）HTRF 检测试剂。该方案能够监测细胞的活力和汇合度。

磷酸化 p70S6K（苏氨酸 389）单板检测方案
使用 HTRF 试剂检测磷酸化 p70S6K（苏氨酸 389）可在单个用于培养、刺激和裂解的板中进行，无需洗涤步骤。这种为高通量筛选（HTS）设计的方案能够实现微型化，同时保持稳定的 HTRF 质量。

检测验证
使用磷酸化 p70S6K 细胞检测试剂盒进行 HTRF 检测与蛋白质印迹法的比较
将人 HEK293 细胞在 T175 培养瓶中于 37°C、5% CO₂条件下培养 1 天。第 2 天，移除细胞培养基后，加入 3ml 补充的裂解缓冲液，孵育 30 分钟。离心 10 分钟后收集可溶性上清液。使用等量的裂解物进行蛋白质印迹法与 HTRF 的平行比较。HTRF 磷酸化 p70S6K（苏氨酸 389）检测可检测到 3000 个细胞，而蛋白质印迹法需要 6000 个细胞。磷酸化 p70S6K HTRF 检测的灵敏度是蛋白质印迹法的 2 倍。

药理学反应：激动剂和拮抗剂作用模式
将人 HEK293 细胞（100,000 个细胞 / 孔）与两种浓度的指定抑制剂（渥曼青霉素和 LY294002）共同孵育，随后用 1.0µM 胰岛素在 37°C 条件下刺激 30 分钟。裂解孵育 30 分钟后，采用双板检测方案测量磷酸化 p70S6K。

雷帕霉素对受刺激的 NIH3T3 细胞的抑制作用
将小鼠 NIH3T3 细胞（100,000/50,000/25,000 个细胞 / 孔）与不同浓度的雷帕霉素抑制剂孵育 3 小时，随后用 1.0µM 胰岛素在 37°C 条件下刺激 30 分钟。裂解孵育 30 分钟后，采用双板方案的 HTRF 磷酸化 p70S6K（苏氨酸 389）检测测量 p70S6K 磷酸化的抑制情况。

简化通路
磷酸化 p70S6K（苏氨酸 389）简化通路
p70S6K 是一种促存活因子，属于丝氨酸 / 苏氨酸蛋白激酶家族。p70S6K 作用于雷帕霉素哺乳动物靶蛋白（mTOR）的下游，通过向多个重要下游效应器（如 S6RP、eIF4B 和 eEF2K）传递信号来调控细胞生长、增殖、存活和迁移，进而诱导蛋白质合成。p70S6K 具有多种功能：它还通过调节胰岛素底物（IRS1）参与胰岛素受体信号传导，并通过对促凋亡蛋白 Bad 的调控来负向调节凋亡，从而发挥存活作用。

规格

其他规格

应用：细胞信号传导
品牌：HTRF
检测方式：HTRF
分子修饰：磷酸化
产品类别：试剂盒
样品体积：16µL
运输条件：干冰运输
靶标类别：磷蛋白
靶标物种：人、小鼠
技术：时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET）
治疗领域：代谢 / 糖尿病、神经科学
单位规格：50,000 个检测点

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货号：64S6KPEY

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