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HTRF TAU P-S356 KIT - 10K PTS

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概述

HTRF 磷酸化 - TAU（Ser356）细胞检测试剂盒是定量内源性在丝氨酸 356 位点磷酸化的磷酸化 - TAU 的理想选择。在阿尔茨海默病（AD）和帕金森病（PD）中，TAU 存在不同状态。

TAU 的过度磷酸化也是多种神经退行性疾病和中枢神经系统疾病的标志物。

工作原理

磷酸化 - TAU（Ser356）检测原理

磷酸化 - TAU（Ser356）检测用于测量在 Ser356 位点磷酸化的 TAU。与蛋白质印迹法不同，该检测完全基于微孔板进行，无需凝胶、电泳或转膜步骤。

磷酸化 - TAU（Ser356）检测使用两种标记抗体：一种带有供体荧光团，另一种带有受体荧光团。第一种抗体经筛选可特异性结合蛋白质上的磷酸化基序，第二种抗体则能不依赖蛋白质的磷酸化状态识别该蛋白质。蛋白质磷酸化会促使形成包含两种标记抗体的免疫复合物，使供体荧光团与受体荧光团靠近，从而产生荧光共振能量转移（FRET）信号。信号强度与样品中磷酸化蛋白质的浓度直接成正比，且无需洗涤步骤即可评估蛋白质的磷酸化状态。

磷酸化 tau s356

磷酸化 - TAU（Ser356）双板检测方案

双板方案包括：先在 96 孔板中培养细胞，然后裂解细胞，再将裂解物转移至 384 孔小体积检测板，之后加入磷酸化 - TAU（Ser356）HTRF 检测试剂。

该方案能够监测细胞活力和汇合度。

磷酸化 tau s356 双板检测方案

磷酸化 - TAU（Ser356）单板检测方案

使用 HTRF 试剂检测磷酸化 - TAU（Ser356）可在单个培养板中完成，该培养板同时用于细胞培养、刺激和裂解。无需洗涤步骤。

这种为高通量筛选（HTS）设计的方案可实现微型化，同时保持稳定的 HTRF 检测质量。

磷酸化 tau s356 板检测方案

检测验证

在人 SH-SY5Y 细胞系中，BIO 诱导的 GSK3 抑制对 Tau Ser356 磷酸化的评估

将人 SH-SY5Y 细胞以 100,000 个细胞 / 孔的密度接种到 96 孔板中。在 37°C、5% CO₂条件下孵育 24 小时后，用浓度递增的 GSK3α/β 抑制剂 BIO（6 - 溴靛玉红 - 3 - 肟）处理细胞 1 小时，随后用冈田酸（100nM）处理 2 小时，再用花萼海绵诱癌素 A（100nM）处理 10 分钟。之后移除培养基，加入 50µL 补充的 1X 裂解缓冲液。在室温下轻轻摇晃裂解 30 分钟后，将 16µL 裂解物转移至 384 孔小体积白色微孔板中，并加入 4µL HTRF 磷酸化 - Tau（Ser356）或总 Tau 检测试剂。过夜孵育后记录 HTRF 信号。

BIO 诱导的 GSK3α/β 抑制可完全抑制 Tau 在丝氨酸 356 位点的磷酸化，而在相同实验条件下，Tau 的表达水平保持稳定。

磷酸化 tau s356 检测验证

在小鼠 Neuro2a 细胞系中，BIO 诱导的 GSK3 抑制对 Tau Ser356 磷酸化的评估

将小鼠 Neuro2a 细胞以 100,000 个细胞 / 孔的密度接种到 96 孔板中。在 37°C、5% CO₂条件下孵育 24 小时后，用浓度递增的 GSK3α/β 抑制剂 BIO（6 - 溴靛玉红 - 3 - 肟）处理细胞 1 小时，随后用冈田酸（100nM）处理 2 小时，再用花萼海绵诱癌素 A（100nM）处理 10 分钟。之后移除培养基，加入 50µL 补充的 1X 裂解缓冲液。在室温下轻轻摇晃裂解 30 分钟后，将 16µL 裂解物转移至 384 孔小体积白色微孔板中，并加入 4µL HTRF 磷酸化 - Tau（Ser356）或总 Tau 检测试剂。过夜孵育后记录 HTRF 信号。

与 SH-SY5Y 细胞类似，BIO 介导的 GSK3α/β 抑制可完全抑制 Tau 在丝氨酸 356 位点的磷酸化。请注意，总 Tau 检测具有人特异性，与小鼠模型无交叉反应。

磷酸化 tau s356 检测验证

HTRF 磷酸化 - Tau（Ser356）检测与蛋白质印迹法的比较

将人神经母细胞瘤 SH-SY5Y 细胞接种到 T175 培养瓶的完全培养基中，在 37°C、5% CO₂条件下孵育 2 天。然后用冈田酸（100nM）处理细胞 2 小时，再用花萼海绵诱癌素 A（100nM）处理 10 分钟。处理后，加入 3mL 补充的 1 号裂解缓冲液，在室温下轻轻摇晃裂解 30 分钟。离心 10 分钟后收集可溶性上清液。

用补充的裂解缓冲液对细胞裂解物进行系列稀释，将 16µL 每种稀释液转移至 384 孔小体积白色微孔板中，然后加入 4µL HTRF 磷酸化 - Tau（Ser356）检测试剂。取等量裂解物，对蛋白质印迹法和 HTRF 检测进行平行比较。

结果表明，至少在这些实验条件下，磷酸化 - Tau（Ser356）检测的灵敏度是蛋白质印迹法的 4 倍。

磷酸化 s356

简化通路

Tau 蛋白在阿尔茨海默病通路中的作用

Tau 在阿尔茨海默病的发病机制中起着重要作用。它会发生过度磷酸化并聚集形成细丝，这些细丝还可进一步浓缩成神经原纤维缠结。Tau 聚集体可能通过类似朊病毒的方式在细胞间传播，从而加剧病理过程。调节 Tau 过度磷酸化并减少 Tau 聚集的药物是可行的治疗方法。

Tau 蛋白的生理作用是促进微管的组装和稳定。目前已发现 Tau 有 6 种异构体，其氨基酸残基数从 352 到 441 不等，这些异构体来自外显子 2、3 和 10 的选择性剪接。Tau 最长的异构体（Tau-441）含有 85 个潜在的磷酸化位点，其中一半已通过实验得到证实。

磷酸化 s356 试剂盒

规格

其他规格

应用领域：细胞信号传导
品牌：HTRF
检测方式：HTRF
兼容裂解缓冲液：裂解缓冲液 1、裂解缓冲液 3、裂解缓冲液 4、裂解缓冲液 5
分子修饰：磷酸化
产品类别：试剂盒
样品体积：16 µL
运输条件：干冰运输
靶标类别：磷酸化蛋白
靶标物种：人、小鼠
技术：时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET）
治疗领域：神经科学
单位规格：10,000 次检测点数

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货号：64TS356PEH

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