当前位置：首页 > 产品中心 > Revvity 均相检测试剂 > Phosphoproteins > HTRF TYK2 TOTAL KIT - 500 PTS 总人源酪氨酸激酶2检测试剂盒，500测试

HTRF TYK2 TOTAL KIT - 500 PTS 总人源酪氨酸激酶2检测试剂盒，500测试

分享给好友

rvty_ls_sds_64TYK2TPEG_FRA rvty_ls_sds_64TYK2TPEG_UK rvty_ls_sds_64TYK2TPEG_SPA rvty_ls_sds_64TYK2TPEG_US rvty_ls_sds_64TYK2TPEG_ITA rvty_ls_sds_64TYK2TPEG_ELL rvty_ls_sds_64TYK2TPEG_DEU

收藏咨询

品牌： Revvity

产品详情
相关解决方案
相关资源
相关视频
相关问答

概述

TYK2（酪氨酸激酶 2）属于非受体型 Janus 酪氨酸激酶家族，该家族还包括 JAK1、JAK2 和 JAK3。多种细胞因子和生长因子（如干扰素、IL12、IL23）与其受体结合后，会诱导 TYK2 磷酸化。激活后的 TYK2 随后会磷酸化其他靶标，包括细胞因子受体和主要底物 STATs（信号转导和转录激活因子）。JAKs/STATs 信号通路可刺激细胞增殖、分化、迁移和凋亡。通过改变 JAK/STATs 信号通路来减少细胞因子诱导的促炎反应，是抗炎治疗中一个极具吸引力的靶点。

工作原理

总 TYK2 检测原理

总 TYK2 检测可定量细胞裂解物中 TYK2 的表达水平。与蛋白质印迹法（Western Blot）不同，该检测完全基于微孔板进行，无需凝胶、电泳或转膜步骤。总 TYK2 检测使用两种标记抗体：一种偶联供体荧光团，另一种偶联受体荧光团。两种抗体都对该蛋白上的特定表位具有高度特异性。当细胞提取物中存在 TYK2 时，加入这些偶联物会使供体荧光团与受体荧光团接近，从而产生 FRET（荧光共振能量转移）信号。信号强度与样品中蛋白质的浓度直接成正比，且该检测采用 “无需洗涤” 的形式，为评估蛋白质表达提供了便利。

总 TYK2 双板检测方案

双板方案包括：先在 96 孔板中培养细胞，然后裂解细胞，再将裂解物转移到 384 孔小体积检测板中，最后加入总 TYK2 HTRF 检测试剂。该方案能够监测细胞活力和汇合度。

总 TYK2 单板检测方案

使用 HTRF 试剂检测总 TYK2 可在单个培养板中完成，该培养板同时用于细胞培养、刺激和裂解，无需洗涤步骤。这种为高通量筛选（HTS）设计的方案支持实验微型化，同时保持稳定的 HTRF 检测质量。

检测验证

hela 细胞中磷酸化 TYK2 和总 TYK2（Tyr1054/1055）的抑制作用

将 hela 细胞（宫颈癌细胞）接种到 96 孔培养处理板中（200,000 个细胞 / 孔），加入完全培养基，在 37°C、5% CO₂条件下孵育过夜。用不同浓度的 Deucravacitinib（BMS-986165）处理细胞 3 小时（37°C、5% CO₂）。随后用 100μM 过钒酸盐和 1nM 干扰素 β 刺激细胞 1 小时（37°C、5% CO₂）。然后加入 50μL 补充的 #4 裂解缓冲液（1X），在室温下轻轻振荡 30 分钟裂解细胞。细胞裂解后，将 16μL 裂解物转移到 384 孔小体积白色微孔板中，并加入 4μL HTRF 磷酸化 TYK2（Tyr1054/1055）或总 TYK2 检测试剂。室温孵育过夜后记录 HTRF 信号。

结果如预期所示，Deucravacitinib 可剂量依赖性地降低 TYK2 的磷酸化水平，但对总蛋白的表达水平无影响。

HEL92.1.7 细胞中磷酸化 TYK2 和总 TYK2（Tyr1054/1055）的抑制作用

将 HEL92.1.7 细胞（人红白血病细胞）接种到半区 96 孔培养处理板中，每孔 400,000 个细胞，加入 20μL 完全培养基，孵育过夜。用 5μL 不同浓度的 Deucravacitinib（BMS-986165）处理细胞 3 小时（37°C、5% CO₂），然后用 1nM 干扰素 β 刺激 15 分钟（37°C、5% CO₂）。随后加入 50μL 补充的 #4 裂解缓冲液（1X），在室温下轻轻振荡 30 分钟裂解细胞。细胞裂解后，将 16μL 裂解物转移到 384 孔小体积白色微孔板中，并加入 4μL HTRF 磷酸化 TYK2（Tyr1054/1055）或总 TYK2 检测试剂。室温孵育过夜后记录 HTRF 信号。

结果如预期所示，Deucravacitinib 可剂量依赖性地降低 TYK2 的磷酸化水平，但对总蛋白的表达水平无影响。

HTRF 总 TYK2 检测与蛋白质印迹法的比较

将 HEL92.1.7 细胞在 T175 培养瓶中用完全培养基培养（37°C、5% CO₂）。孵育 72 小时后，加入 3mL 补充的 #4 裂解缓冲液（1X），在室温下轻轻振荡 30 分钟裂解细胞。

用补充的裂解缓冲液对细胞裂解物进行系列稀释，将 16μL 各稀释液转移到小体积白色微孔板中，然后加入 4μL HTRF 总 TYK2 检测试剂。使用等量的裂解物进行 HTRF 检测与蛋白质印迹法的平行比较。

平行比较结果表明，至少在该实验条件下，HTRF 检测的灵敏度是蛋白质印迹法的 8 倍。

简化通路

TYK2 信号传导简化通路

TYK2 与 JAK1、JAK2 或 JAK3 共同作用，与不同类型的细胞因子 / 干扰素受体（如 IL2、IL23、干扰素 α 和 β 受体）相互作用。细胞因子激活后，TYK2 与 JAK 家族的其他成员发生交叉磷酸化，进而激活转录因子 STAT1、STAT2、STAT3 和 STAT6，这些转录因子会发生二聚化，随后转移到细胞核中，触发调控细胞分化、增殖、存活和适应性免疫反应的基因转录。

规格参数

项目	详情
应用领域	细胞信号传导
兼容自动化	是
品牌	HTRF
检测方式	HTRF（均相时间分辨荧光）
兼容的裂解缓冲液	裂解缓冲液 1、裂解缓冲液 2、裂解缓冲液 3、裂解缓冲液 4
分子修饰	总（蛋白）
产品类别	试剂盒
样品体积	16μL
运输条件	干冰运输
靶标类别	磷酸化蛋白
靶标物种	人
技术原理	TR-FRET（时间分辨荧光共振能量转移）
治疗领域	炎症
单位规格	500 个检测点

没有数据

货号：64TYK2TPEG

一键复制

参考价格 ¥ 29723.99

产品规格

1盒/500测试￥29723.99

参考货期：3-4周

选择数量

当前规格1件起购

加入购物车询价