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HTRF (H) VAV1 TOTAL KIT - 10K PTS

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概述

VAV1，也称为 Vav 原癌基因 1，是一种信号蛋白，在细胞信号传导和免疫反应中发挥关键作用。它主要在造血来源的细胞中表达，包括 T 细胞、B 细胞和自然杀伤细胞。

VAV1 作为 Rho 家族 GTP 酶（包括 Rac1、Rac2 和 RhoA）的鸟嘌呤核苷酸交换因子（GEF）发挥作用。VAV1 通过促进这些酶上的 GDP（二磷酸鸟苷）与 GTP（三磷酸鸟苷）交换来激活它们。通过这种机制，VAV1 是细胞骨架重排、细胞黏附、增殖和迁移等基本细胞过程的重要调节因子。

在免疫细胞中，VAV1 是特异性抗原受体（包括 T 细胞受体（TCR）和 B 细胞受体（BCR））下游信号传导的重要中介。因此，VAV1 与多种疾病相关，包括自身免疫性疾病系统性红斑狼疮（SLE）和类风湿性关节炎（RA）。在这些疾病中，异常的 VAV1 信号传导可能导致免疫失调和炎症。此外，VAV1 还与某些类型的癌症相关，其异常激活可促进细胞转化和转移。

工作原理

HTRF 人总 VAV1 检测原理

总 VAV1 检测可定量细胞裂解物中 VAV1 的表达水平。与蛋白质印迹法不同，该检测完全基于微孔板进行，无需凝胶、电泳或转膜步骤。检测使用两种标记抗体，一种偶联供体荧光团，另一种偶联受体荧光团。两种抗体都对该蛋白上的特定表位具有高度特异性。当细胞提取物中存在 VAV1 时，加入这些偶联物会使供体荧光团与受体荧光团接近，从而产生 FRET（荧光共振能量转移）信号。信号强度与样品中蛋白质的浓度直接成正比，且该检测采用 “无需洗涤” 的形式，为评估蛋白质表达提供了便利。

HTRF 人总 VAV1 单板检测方案

使用 HTRF 试剂检测总 VAV1 可在单个培养板中完成，该培养板同时用于细胞培养、刺激和裂解，无需洗涤步骤。这种为高通量筛选（HTS）设计的方案支持实验微型化，同时保持稳定的 HTRF 检测质量。

HTRF 人总 VAV1 双板检测方案

双板方案包括：先在 96 孔板中培养细胞，然后裂解细胞，再将裂解物转移到小体积检测板（HTRF 384 孔小体积板或 96 孔小体积板均可）中，最后加入 HTRF 总 VAV1 检测试剂。该方案能够监测细胞活力和汇合度。

检测验证

经过钒酸盐处理的细胞的 HTRF 磷酸化 / 总 VAV1 检测的剂量反应

将 Jurkat 细胞（100,00 个细胞 / 孔）以 25µL 的体积接种到 96 孔板的完全培养基中，加入 5µL 不同浓度的、用培养基稀释的过钒酸盐处理细胞，然后在 37°C、5% CO₂条件下孵育 30 分钟。

用 10µL 4x 裂解缓冲液 #1 在室温下裂解细胞 45 分钟。裂解后，将 16µL 裂解物转移到小体积白色微孔板中，随后分别加入 2µL 供体和受体 HTRF 磷酸化 Vav1 或总 VAV1 检测试剂。室温孵育过夜后记录 HTRF 信号。

简化通路

VAV1 信号通路

受体胞内部分的构象变化促进酪氨酸激酶 Lck 和 ZAP-70 的募集，这些激酶使其酪氨酸结构域以及其他邻近的信号蛋白（如 LAT（T 细胞活化连接蛋白））磷酸化。

磷酸化的 LAT 随后募集 VAV1 并促进其磷酸化和激活。磷酸化的 VAV1 进而催化 Rho 家族蛋白质（特别是 Rac1 和 Cdc42）上的 GDP/GTP 交换。这些 Rho 蛋白随后触发一系列下游信号事件，包括将转录因子输送到细胞核，以促进细胞骨架重排、细胞黏附、迁移和增殖，以及其他促进病原体或受损细胞清除的免疫细胞机制。

规格参数

其他规格

应用领域：细胞信号传导
品牌：HTRF
检测方式：HTRF
分子修饰：总（蛋白）
产品类别：试剂盒
样品体积：16µL
运输条件：干冰运输
靶标类别：磷酸化蛋白
靶标物种：人
技术原理：TR-FRET（时间分辨荧光共振能量转移）
单位规格：10,000 个检测点

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货号：64VAV1TPEH

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