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HTRF VEGFR2 TOTAL KIT - 50K PTS

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概述

用于监测总 VEGFR2 调控的均相细胞检测法。VEGFR2 介导的信号数据可用于血管生成、血管通透性和癌症干细胞调控研究。

工作原理

总 VEGFR2 检测原理

总 VEGFR2 检测用于测量 VEGFR2。与蛋白质印迹法不同，该检测完全基于微孔板进行，无需凝胶、电泳或转膜步骤。总 VEGFR2 检测使用两种标记抗体：一种结合供体荧光团，另一种结合受体荧光团。第一种抗体经筛选可特异性结合蛋白质上的磷酸化基序，第二种抗体则能不依赖蛋白质的磷酸化状态对其进行识别。蛋白质磷酸化会促使形成包含两种标记抗体的免疫复合物，使供体荧光团与受体荧光团靠近，从而产生 FRET 信号。信号强度与样品中磷酸化蛋白质的浓度直接成正比，且提供了一种在无需洗涤的检测形式下评估蛋白质磷酸化状态的方法。

总 VEGFR2 双板检测方案

双板方案包括先在 96 孔板中培养细胞，然后进行裂解，再将裂解物转移到 384 孔小体积检测板中，之后添加总 VEGFR2 HTRF 检测试剂。该方案能够监测细胞的活力和汇合度。

总 VEGFR2 单板检测方案

使用 HTRF 试剂检测总 VEGFR2 可在单个用于培养、刺激和裂解的板中进行。无需洗涤步骤。这种为高通量筛选（HTS）设计的方案能够实现小型化，同时保持稳定的 HTRF 质量。

检测验证

胰岛素对人脐静脉内皮细胞（Huvec）中磷酸化和总 VEGFR2 检测的剂量反应效应

将人脐静脉内皮细胞以每孔 150,000 个细胞的密度接种到 96 孔板中。在 37°C、5% CO₂条件下过夜孵育后，向细胞中加入一系列稀释的人 VEGF，在 37°C、5% CO₂条件下处理 3 分钟。移除刺激培养基，加入 50µL 裂解缓冲液。轻轻振荡进行 30 分钟的裂解步骤。将 16µL 样品转移到 384 孔小体积板中，然后加入 4µL 磷酸化 VEGFR2 HTRF 检测试剂。同时，将 16µL 样品分到其他孔中，然后加入 4µL HTRF 总 VEGFR2 检测试剂。过夜后记录信号。

总 VEGFR2 检测与蛋白质印迹法的比较

将人脐静脉内皮细胞培养至 80% 汇合度。经人 VEGF 处理 3 分钟后，裂解细胞并通过离心收集可溶性上清液。对细胞裂解物进行系列稀释，将 16µL 每种稀释液转移到 384 孔小体积白色微孔板中，最后加入 VEGFR2 细胞试剂盒检测试剂。

平行比较显示，HTRF 总检测的灵敏度至少是蛋白质印迹法的 32 倍。

简化通路

血管内皮生长因子（VEGF）是一种内皮细胞特异性有丝分裂因子，常与肿瘤诱导的血管生成激活相关。在肿瘤中，VEGF 的分泌会上调。在 endothelial cell 表面，分泌的蛋白质与至少两种不同的血管内皮生长因子受体（VEGFRs）高亲和力结合，即 VEGFR-1（也称为 fms 样酪氨酸激酶（Flt-1））和 VEGFR-2（也称为胎儿肝激酶（Flk-1））。

VEGF 对内皮细胞的激活会导致受体自身磷酸化和后续的信号传导。目前已发现多个磷酸化位点。

VEGFR 与血管生成有关，联合抑制 VEGF 和 PDGF 信号可促进肿瘤血管消退。

规格

应用：细胞信号传导
品牌：HTRF
检测方式：HTRF
分子修饰：总（蛋白）
产品类别：试剂盒
样品体积：16µL
运输条件：干冰运输
靶标类别：磷蛋白
靶标物种：人类
技术：时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET）
治疗领域：
- 心血管疾病
- 非酒精性脂肪性肝炎 / 纤维化
- 神经科学
- 肿瘤与炎症
单位规格：50,000 个检测点

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货号：64VEGFR2TPEY

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