HTRF STREPTAVIDIN-EU - 5K PTS Eu标记的链霉亲和素- 5，000测试

概述
链霉亲和素已用铕穴状配体（Eu crypate）进行了标记。生物素与链霉亲和素具有高亲和力（解离常数 Ka = 10¹⁵M⁻¹）。它们之间的结合迅速且稳定，这使得其成为各种检测的理想选择，如酶检测、蛋白质 - 蛋白质结合检测以及分子生物学检测。

规格
其他规格

工作原理
检测原理
在 HTRF 相互作用检测中，一个结合伙伴（直接或间接）用供体标记，另一个用受体标记（同样，直接或间接）。信号强度与这两个结合伙伴的结合情况成正比。在此处展示的例子中：链霉亲和素 - 铕穴状配体与生物素化标记的伙伴 A 结合，而伙伴 B * 与用 HTRF 受体标记的特异性抗体结合。* 伙伴 B 也可以被标记、与 Fc 段融合。在这些情况下，使用用受体标记的相应 HTRF 试剂（抗标签抗体、抗种属抗体、蛋白 A、链霉亲和素）进行检测。

检测方案
右侧的例子描述了使用最终检测体积为 20 微升来检测生物素化标记的伙伴 A 与未标记的伙伴 B * 之间相互作用的方案。加入两种伙伴（10 微升），孵育，加入链霉亲和素 - 铕穴状配体（5 微升）和用受体标记的抗伙伴 B 抗体（5 微升），孵育后读数。* 伙伴 B 也可以被标记、与 Fc 段融合或直接标记。在这些情况下，使用用供体标记的相应 HTRF 试剂（抗标签抗体、抗种属抗体、蛋白 A、链霉亲和素）进行检测。

检测详情

检测次数与活性部分有何关系？

每孔的平均偶联物数量反映了整体生物材料的含量。通常，使用活性部分的量比使用总偶联物的量更可取。对于穴状配体（Cryptate）和 d2 偶联物，总偶联物的量等于活性部分的量，因为标记物的分子量可以忽略不计。对于 XL665 标记的实体来说并非如此，其总偶联物的量会根据 XL665 偶联物的最终摩尔比而变化，然而，瑞孚迪提供的活性部分的量是恒定的，并基于订购的检测次数。

检测规格

推荐的穴状配体（Cryptate）和 XL665 偶联物用量
穴状配体偶联物的用量不能过多，以防止读数仪饱和以及产生不可接受的背景水平。在大多数情况下，1 至 5 纳摩尔的穴状配体浓度是合适的，并且根据所使用的兼容 HTRF 的读数仪不同，在 620 纳米处会产生 20000 至 80000 计数每秒（cps）的信号。XL665 偶联物必须尽可能与其检测对应物相匹配，以便使最大数量的生物分子被 XL665 受体标记。因此，为了在检测浓度为 20 纳摩尔时检测标记分子，抗标签 - XL665 的浓度应与其等摩尔或更高。