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当前位置:首页 > 产品中心 > Revvity 均相检测试剂 > Prot-prot interac > HTRF PAB ANTI HUMAN IGG-D2 - 1K PTS 免疫球蛋白d2测量试剂 - 1,000测试

概述

对山羊抗兔免疫血清的 IgG 进行免疫纯化并用 d2 标记。PAb 抗兔 IgG-d2 可用于检测未标记的兔特异性抗体与靶分子或 Ig 融合蛋白的结合。

该试剂可用于生化和细胞形式,以研究各种相互作用:蛋白质/蛋白质、蛋白质/肽、蛋白质/DNA、蛋白质/RNA、蛋白质/碳水化合物、蛋白质/小分子、受体/配体。

HTRF 可以检测从皮摩尔到低毫摩尔的广泛亲和常数。

规格

检测点
1000
检测靶标类型
荧光试剂
检测技术
HTRF
品牌
HTRF
数量
1
治疗领域
心血管
传染病
炎症
新陈代谢/糖尿病
NASH/纤维化
神经
肿瘤学和炎症
罕见病
单位面积
1,000 个检测点


运作方式

检测原理

在 HTRF 相互作用测定中,一个伴侣(直接或间接)与供体标记,另一个伴侣与受体(同样直接或间接)标记。信号的强度与 2 个伴侣的结合成正比。在此处显示的示例中:PAb 抗兔 IgG-d2 与兔 Fc 融合标记的伴侣 A 结合,而伴侣 B* 与用 HTRF 供体标记的特异性 Ab 结合。*伴侣 B 也可以被生物素化、标记、Fc 融合。在这些情况下,使用带有供体标记的相应 HTRF 试剂(抗标签、抗物种、protA、链霉亲和素)进行检测。

HTRF PAb Anti Rabbit IgG-d2 1.svg

 

检测方案

右侧的示例描述了使用 20 μL 最终检测体积检测 Rabbit Fc 融合标记的伴侣 A 和未标记的伴侣 B* 之间相互作用的方案。分液 2 个伴侣 (10 μL),孵育,加入 PAb 抗兔 IgG-d2 (5 μL) 和用供体标记的抗伴侣 B (5 μL),孵育并读取。
*伴侣 B 也可以被生物素化、标记、Fc 融合或直接标记。在这些情况下,使用标有供体的相应 HTRF 试剂(抗标签、抗物种、protA、链霉亲和素)进行检测。

HTRF PAb Anti Rabbit IgG-d2 2.svg

 

检测详情

为您的特定应用构建 HTRF 相互作用检测

试剂按检测次数(20 μL 反应)出售。与 XL665 或 d2 偶联的抗体以每孔 20 ng 抗体为基础提供。还提供了每个样品瓶的活性基团量(以及每个样品瓶的示踪剂数量 - 参见产品描述表)。活性部分定义为偶联物(例如抗体)的活性部分。

检测数量与活性部分有何关系?

每孔的平均偶联物数量反映了整体生物材料含量。使用活性部分量通常优于总偶联物的数量。对于 Cryptate 和 d2 偶联物,总偶联物量等于活性部分的偶联物量,因为标记物的分子量可以忽略不计。对于 XL665 标记的实体,情况并非如此,总偶联物的数量将根据 XL665 偶联物的最终摩尔比而变化,但是,Revvity 提供的活性部分的量是恒定的,并且基于订购的测试次数。

HTRF PAb Anti Rabbit IgG-d2 3.svg

 

Cryptate 和 XL665 偶联物的推荐数量

Cryptate 偶联物不得过多,以防止读者饱和和不可接受的背景水平。在大多数情况下,1 至 5 nM 的隐窝酸盐浓度是合适的,并且在 620 nm 处将产生 20,000 至 80,000 cps,具体取决于所使用的 HTRF 兼容微孔板检测仪。XL665 偶联物必须尽可能地匹配其检测对应物,以便用 XL665 受体标记最大数量的生物分子。因此,要在 20 nM 的测定浓度下检测标记分子,抗 Tag-XL665 的浓度应为等摩尔或更高。


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