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HTRF MAB ANTI-6HIS-TB GOLD - 1K PTS 新6组氨酸Tb测量试剂-1,000测试

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概述

抗 6HIS - Tb 隐花青金单克隆抗体（MAb Anti - 6HIS - Tb cryptate Gold）是一种针对用 Tb 标记的多聚组氨酸标签融合蛋白而制备的单克隆抗体。它能识别合成的多聚组氨酸或多聚组氨酸标签融合蛋白。

该试剂可用于生化和细胞实验，以研究多种相互作用，包括蛋白质 / 蛋白质、蛋白质 / 肽、蛋白质 / DNA、蛋白质 / RNA、蛋白质 / 碳水化合物、蛋白质 / 小分子、受体 / 配体之间的相互作用。

时间分辨荧光共振能量转移技术（HTRF）能够检测从皮摩尔到低毫摩尔范围的广泛亲和常数。

规格

其他规格
- 应用：蛋白质 - 蛋白质相互作用
- 品牌：HTRF
- 检测方式：HTRF
- 产品类别：荧光试剂
- 运输条件：室温运输
- 目标类别：结合分析
- 技术：时间分辨荧光共振能量转移（TR - FRET）
- 治疗领域：心血管疾病、传染病、炎症、代谢性疾病 / 糖尿病、非酒精性脂肪性肝炎（NASH）/ 纤维化、神经学疾病、肿瘤与炎症、罕见病
- 单位规格：1000 次检测用量

工作原理

检测原理

在均相时间分辨荧光能量转移（HTRF）相互作用检测中，一个相互作用伙伴（直接或间接）用供体标记，另一个用受体标记（同样，直接或间接）。信号强度与这两个相互作用伙伴的结合程度成正比。在此处所示的示例中：抗 6HIS Tb 隐花青金单克隆抗体（MAb Anti-6HIS Tb cryptate Gold）与带有 6 个组氨酸标签的伙伴 A 结合，而伙伴 B * 则与用 HTRF 受体标记的特定抗体结合。* 伙伴 B 也可以是生物素化的、带标签的、与 Fc 融合的。在这些情况下，使用相应的用受体标记的 HTRF 试剂（抗标签抗体、抗物种抗体、蛋白 A、链霉亲和素）进行检测。

检测方案

右侧的示例描述了最终检测体积为 20 微升的方案，用于检测带有 6 个组氨酸标签的伙伴 A 与未标记的伙伴 B * 之间的相互作用。加入两个伙伴（各 10 微升），孵育，加入抗 6HIS Tb 隐花青金单克隆抗体（5 微升）和用受体标记的抗伙伴 B 抗体（5 微升），孵育后进行读数。* 伙伴 B 也可以是生物素化的、带标签的、与 Fc 融合的或直接标记的。在这些情况下，使用相应的用受体标记的 HTRF 试剂（抗标签抗体、抗物种抗体、蛋白 A、链霉亲和素）进行检测。

检测详情

检测次数与活性成分有何关系？

每孔的平均偶联物数量反映了整体生物材料的含量。通常，使用活性成分的量比使用总偶联物的量更可取。对于隐花青（Cryptate）和 d2 偶联物，总偶联物的量等于活性成分的量，因为标记物的分子量可忽略不计。对于 XL665 标记的实体来说并非如此，其总偶联物的量会根据 XL665 偶联物的最终摩尔比而变化。然而，由 Revvity 公司提供的活性成分的量是恒定的，且基于订购的检测次数。

检测验证

用铕（Europium）和铽（Terbium）抗体来鉴定分子间相互作用

根据标签的位置不同，不同蛋白质的检测性能可能会有所差异。在这里，我们描述了平行使用不同的 Revvity 抗 6His 偶联物（铕、铽、铕金、铽金）以及 Lanthascreen 抗 His 标签抗体（铕、铽）的情况。这些案例表明，根据所研究的相互作用不同，可能需要使用不同的抗体：在一种情况下，基于铕的抗体表现良好，而在另一种情况下，铽的效果更好。在下面测试的每一种相互作用中，Revvity 抗 6His 金偶联物的表现都优于 Lanthascreen 抗 6His 标签抗体。

BRD4 (1)-H4 肽相互作用的检测原理

带有 6His 标签的 BRD4 (1) 阅读器结构域与生物素化的肽底物 H4 的结合通过一种偶联物混合物进行检测：用针对 6His 标签的隐花青标记的供体抗体以及链霉亲和素 - XL665，用于检测生物素化的肽。

确定最佳的 H4 肽浓度

肽滴定的第一步表明，当使用 Lanthascreen 铕或铽抗体供体时无法进行检测（铽标记的数据未显示）。对于这些情况，无法进一步考虑进行化合物筛选。然而，Revvity 公司的金标版本和经典版本的抗 6His 抗体都能够检测到这种相互作用。使用金标版本时，检测窗口有所增加。

JQ1 对 BRD4-H4 相互作用的抑制作用

发现 JQ1 抑制剂的半抑制浓度（IC50）在 12 至 24.5 纳摩尔之间，与文献报道一致。正如预期的那样，新型抗 6His 隐花青金抗体显示出更大的检测窗口。

NEFcore/ Hck (SH3 结构域) 蛋白质 - 蛋白质相互作用的检测原理

NEFcore 与 HcK SH3 结构域的相互作用是治疗 HIV 传染病的一个重要靶点。这种相互作用的抑制剂是重要的目标，被视为治疗方案。使用 Revvity 公司的蛋白质 - 蛋白质相互作用（PPI）抗 GST-d2 单克隆抗体（浓度为 3 纳摩尔）来检测与 GST 标签融合的 NEFcore。使用抗 6His 金供体偶联物来检测含有 6His 标签的 HcK SH3 结构域。

确定最佳的 GST-Nef 浓度

当使用 Revvity 抗 6His Tb 隐花青抗体时无法进行检测（使用铕时观察到相同结果，数据未显示），而金标版本显示出检测窗口的显著增加，使得能够进一步筛选这种蛋白质 - 蛋白质相互作用。结果优于使用 Lanthascreen Tb 抗 His 标签抗体所获得的结果（使用铕时得出相同结论，数据未显示）。

FynSH3 对 NEFcore/ Hck (SH3 结构域) 相互作用的抑制作用

使用 FynSH3 蛋白进行抑制剂筛选检测，FynSH3 蛋白与 Nef 核心结构域结合，与 HcK SH3 结构域竞争。结果显示半抑制浓度（IC50）为 0.7 至 2 微摩尔。使用 Revvity 抗 6His Tb 隐花青抗体时，检测窗口略有改善。

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货号：61HI2TLF

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