链霉亲和素(Streptavidin)已用 d2 进行了标记。生物素(Biotin)与链霉亲和素具有高亲和力(解离常数 Ka = 10¹⁵ M⁻¹)。它们之间的结合迅速且稳定,这使得它成为各种检测(如酶检测、蛋白质 - 蛋白质结合检测和分子生物学检测)的理想选择。
- 其他规格
- 应用领域:蛋白质 - 蛋白质相互作用
- 品牌:HTRF
- 检测方式:HTRF
- 产品类别:荧光试剂
- 运输条件:常温运输
- 目标类别:结合分析
- 技术:时间分辨荧光共振能量转移(TR - FRET)
- 治疗领域:心血管疾病、传染病、炎症、代谢 / 糖尿病、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)/ 纤维化、神经科学、肿瘤与炎症、罕见病
- 单位规格:1000 次检测用量
在均相时间分辨荧光共振能量转移(HTRF)相互作用检测中,一个相互作用伙伴(直接或间接)用供体标记,另一个用受体标记(同样,直接或间接)。信号强度与这两个相互作用伙伴的结合程度成正比。
在此处所示的示例中:链霉亲和素 - d2 与生物素化的伙伴 A 结合,而伙伴 B * 则与用 HTRF 供体标记的特定抗体结合。
* 伙伴 B 也可以是带标签的或与 Fc 融合的。在这些情况下,使用相应的用供体标记的 HTRF 试剂(抗标签抗体、抗物种抗体、蛋白 A、链霉亲和素)进行检测。

右侧的示例描述了最终检测体积为 20 微升的方案,用于检测生物素化标记的伙伴 A 与未标记的伙伴 B * 之间的相互作用。
加入两个伙伴(各 10 微升),孵育,加入链霉亲和素 - d2(5 微升)和用供体标记的抗伙伴 B 抗体(5 微升),孵育后读数。
* 伙伴 B 也可以是带标签的、与 Fc 融合的或直接标记的。在这些情况下,使用相应的用供体标记的 HTRF 试剂(抗标签抗体、抗物种抗体、蛋白 A、链霉亲和素)进行检测。

试剂按检测次数(20 微升反应体系)出售。XL665 或 d2 偶联物按每孔 20 纳克抗体的标准提供。每瓶试剂中活性成分的含量也会标明(以及每瓶中的示踪剂数量 - 见产品说明书)。活性成分被定义为偶联物的活性部分(例如抗体)。
每孔的平均偶联物数量反映了整体生物材料的含量。通常,使用活性成分的量比使用总偶联物的量更可取。对于隐花青(Cryptate)和 d2 偶联物,总偶联物的量等于活性成分的量,因为标记物的分子量可忽略不计。对于 XL665 标记的实体来说并非如此,其总偶联物的量会根据 XL665 偶联物的最终摩尔比而变化。然而,由 Revvity 公司提供的活性成分的量是恒定的,且基于订购的检测次数。

隐花青偶联物的用量不能过多,以防止读数仪饱和以及产生不可接受的背景水平。在大多数情况下,1 至 5 纳摩尔的隐花青浓度是合适的,并且根据所使用的兼容 HTRF 的读数仪不同,在 620 纳米处会产生 20,000 至 80,000 计数 / 秒(cps)。XL665 偶联物必须尽可能与其检测对应物匹配,以便使最大数量的生物分子被 XL665 受体标记。因此,为了在 20 纳摩尔的检测浓度下检测一个带标签的分子,抗标签 - XL665 的浓度应与之等摩尔或更高。