该产品是针对谷胱甘肽 S - 转移酶(GST)制备的 IgG2a 型单克隆抗体,经 d2 荧光基团标记后形成抗 GST-d2 试剂。该抗体可与多种表达载体产生的 GST 标签融合蛋白发生特异性反应,适配生化与细胞两种实验体系,广泛用于研究蛋白 / 蛋白、蛋白 / 多肽、蛋白 / DNA、蛋白 / RNA、蛋白 / 碳水化合物、蛋白 / 小分子、受体 / 配体等多种分子间的相互作用。依托 HTRF 技术,该试剂能够检测解离常数范围从皮摩尔到低毫摩尔的各类亲和力相互作用,满足不同强度分子作用的研究需求。
在 HTRF 相互作用检测体系中,参与相互作用的两个分子伴侣需分别通过直接或间接的方式标记信号供体与受体,检测信号强度与两个伴侣的结合程度呈正相关。具体应用场景中,抗 GST-d2 会特异性结合带有 GST 标记的结合伴侣 A,结合伴侣 B 则与标记了 HTRF 供体的特异性抗体相结合。若结合伴侣 B 经过生物素化、标签标记或 Fc 融合修饰,可选用抗标签、抗种属、蛋白 A、链霉亲和素等对应的 HTRF 供体标记试剂完成检测。(标注:HTRF MAb Anti GST-d2 1.svg,对应 “抗 GST-d2 检测原理示意图”)
以 20 微升最终反应体积,检测 GST 标记的结合伴侣 A 与非标记结合伴侣 B 的相互作用为例,具体操作步骤如下:首先加入 10 微升两种结合伴侣的混合液并完成孵育;随后加入 5 微升抗 GST-d2 试剂和 5 微升标记供体的抗结合伴侣 B 抗体;再次孵育后读取荧光信号即可。若结合伴侣 B 为生物素化、标签标记、Fc 融合修饰或直接标记类型,替换为对应的供体标记 HTRF 试剂即可适配检测。(标注:HTRF MAb Anti GST-d2 2.svg,对应 “抗 GST-d2 检测流程示意图”)
试剂按检测次数售卖,单次检测的标准反应体积为 20 微升。经 XL665 或 d2 标记的抗体类试剂,遵循每孔含 20 纳克抗体的标准供应。每瓶试剂均会明确标注活性部分含量与瓶内示踪剂数量,活性部分特指偶联物中具备核心结合活性的成分,本产品中即为抗 GST 单克隆抗体。
每孔中偶联物的平均含量可反映体系内生物材料的总体含量,实验计量时建议优先参考活性部分的含量,而非偶联物总含量。对于铕 / 铽穴状化合物和 d2 类偶联物,由于标记物分子量极小可忽略不计,偶联物总含量与活性部分含量完全一致;而 XL665 标记的偶联物,其总含量会随 XL665 偶联物的最终摩尔比变化而波动。该试剂的活性部分含量由 Revvity 精准设定,始终保持恒定,且含量与订购的检测次数直接挂钩。(标注:HTRF MAb Anti GST-d2 3.svg,对应 “活性部分含量与检测次数关联说明图”)