HTRF CEREBLON BIND. KIT - 100K PTS

产品概述

一种快速简便的方法，用于识别与Cereblon WT蛋白的新型结合物。

Cereblon，又称CRBN，参与多种生物学过程，与增殖、凋亡、细胞代谢及多种疾病的发生密切相关。Cereblon也是双功能蛋白降解靶向嵌合体（PROTAC）分子最常招募的两大E3泛素连接酶之一，用于诱导目标蛋白的泛素化及随后的蛋白酶体降解。Cereblon与多种蛋白相互作用，形成具有功能的E3泛素连接酶复合物，其中CRBN充当E3泛素连接酶复合物的底物受体，将蛋白靶向至蛋白酶体进行降解。

因此，识别新型Cereblon配体通过诱导非必要蛋白的蛋白酶体依赖性降解，成为控制肿瘤学、神经退行性或代谢性疾病相关生物学过程的有效途径。

工作原理

检测原理
HTRF Cereblon结合检测试剂盒采用竞争性检测模式，使用Thalidomide-Red作为Cereblon配体、带有GST标签的人源Cereblon蛋白，以及抗GST穴状化合物标记的抗体。您的待测化合物会与Thalidomide-Red竞争，从而阻止FRET（荧光共振能量转移）的发生。

检测方案
本试剂盒可在96孔或384孔低容量白色微孔板（终体积20 µL）中运行。操作流程如下：将样品或标准品直接分装至检测板中，随后加入人源GST标签Cereblon蛋白，接着分装HTRF检测试剂（即铕穴状化合物标记的抗GST抗体，以及XL665标记的Thalidomide-Red）。HTRF荧光基团标记的试剂可预先混合并在单个分装步骤中添加。整个过程无需洗涤步骤。该方案还可通过按比例调整各添加体积，实现进一步的小型化或放大化。

检测验证

Cereblon正构配体的筛选
将已知作为Cereblon配体的多种化合物加入检测体系中。来那度胺（Lenalidomide，检测标准品）、泊马度胺（Pomalidomide）和沙利度胺（Thalidomide）均表现出与文献报道高度吻合的正确效力和药理学排序。VH032——一种非特异性化合物，为众所周知的VHL E3连接酶正构配体——以及Nutlin3a——另一种非特异性化合物，为众所周知的MDM2 E3连接酶正构配体——对检测体系无任何影响，证实了该试剂盒对Cereblon结合物的特异性。

PROTAC化合物（基于Cereblon配体）的筛选
将多种已知基于Cereblon配体的PROTAC化合物加入检测体系中。BSJ-04-132、BSJ-03-123、dBRD9、TL13112和MT802均表现出与文献报道高度吻合的正确效力。AT11和CM1——两种非特异性化合物，为众所周知的基于VHL配体的PROTAC化合物——对检测体系无任何影响，证实了该试剂盒仅特异性检测基于Cereblon配体的PROTAC化合物。

DMSO对检测性能的影响
测试了不同百分比的DMSO（孔内终浓度从0.4%至2%）。结果表明，随着DMSO百分比的增加，检测窗口有所降低，但药理学表现保持稳定。

简化通路

Cereblon在CRL4-CRBN E3泛素连接酶复合物中的作用
Cereblon，又称CRBN，是一种广泛表达的由442个氨基酸组成的蛋白（55 kDa）。

CRBN与DNA损伤结合蛋白1（DDB1）、Cullin 4（Cul4）和Cullin调节子1（RoC1）相互作用，形成功能性的E3泛素连接酶复合物。在该复合物中，CRBN充当底物识别亚基，通过泛素-蛋白酶体系统（UPS）将底物蛋白靶向至蛋白酶体进行降解。因此，该E3泛素连接酶复合物可通过靶向不同底物实现多种细胞应答。

CRBN在大脑中的表达与记忆和学习过程相关。无义突变（R419X）是非综合征型智力障碍的致病原因。

CRBN还通过调节离子通道功能来确保正常的细胞增殖和代谢。

Cereblon也是免疫调节药物（IMiDs）沙利度胺、泊马度胺和来那度胺的主要直接靶点，这些药物均为FDA批准的用于治疗多发性骨髓瘤的药物。这些药物通过CRBN E3泛素连接酶诱导淋巴转录因子IKZF1和IKZF3的泛素化和降解。

技术规格