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HTRF THALIDOMIDE - RED LIGAND 红色荧光配体

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概述

HTRF 沙利度胺 - 红色配体主要用于利用 HTRF® 技术绘制与 cereblon（ cereblon）蛋白的亲和结合曲线。

cereblon（又称 CRBN）参与多种生物学过程，与细胞增殖、凋亡、细胞代谢以及多种疾病的发生密切相关。cereblon 也是双功能蛋白水解靶向嵌合体（PROTACs）招募的两种最常用的 E3 连接酶之一，可诱导靶蛋白的泛素化及随后的蛋白酶体降解。cereblon 与多种蛋白质相互作用，形成功能性 E3 泛素连接酶复合物，其中 CRBN 作为 E3 泛素连接酶复合物的底物受体，靶向蛋白质进行水解。

HTRF 沙利度胺 - 红色配体结合检测可与 HTRF cereblon 结合试剂盒（#64BDCRBNPEG/H）联合用于协同结合研究，以监测 PROTAC 蛋白底物对 HTRF 沙利度胺 - 红色配体与 cereblon 蛋白的解离常数（Kd）的影响，从而能够借助 HTRF cereblon 结合试剂盒准确分析所监测到的协同效应。

工作原理

HTRF 沙利度胺 - 红色配体与 cereblon 蛋白的结合检测原理

HTRF 沙利度胺 - 红色配体的结合通过直接结合检测格式进行检测，该格式使用抗 GST - 铕穴状化合物抗体，该抗体可与带 GST 标签的人野生型 cereblon 结合。当染料彼此靠近时，用光源（激光或闪光灯）激发供体，会触发向受体的荧光共振能量转移（FRET），进而使受体在特定波长（665 nm）处发出荧光（图 A）。通过从总信号中减去非特异性结合信号来计算特异性结合信号，从而能够确定 HTRF 沙利度胺 - 红色配体的解离常数（Kd）（图 B）。

HTRF 沙利度胺 - 红色配体结合检测方案

HTRF 沙利度胺 - 红色配体的饱和结合实验可在 384 孔板中进行：先加入 5µL 的 9 号稀释缓冲液（用于总结合检测）或 cereblon 结合标准品（用于非特异性结合检测）；然后加入 5µL 的 PROTAC 结合缓冲液 1（用于参考）或在 PROTAC 缓冲液 1 中稀释的 PROTAC 蛋白底物（用于协同研究）；接着加入 5µL 的 GST-CRBN 蛋白；最后加入 5µL 的 HTRF 沙利度胺 - 红色配体与抗 GST 铕穴状化合物抗体的预混合溶液。在室温下孵育 3 小时后，测量 HTRF 比值。

在室温下孵育 2 小时后，测量 HTRF 比值。

检测详情

HTRF 沙利度胺 - 红色配体的解离常数（无 PROTAC 蛋白底物的参考值）：3.2nM±0.8（标准差）

检测验证

HTRF 沙利度胺 - 红色配体协同结合研究示例

HTRF 沙利度胺 - 红色配体协同结合研究示例：在与使用 HTRF CRBN 结合试剂盒进行 PROTAC 化合物筛选检测相同的条件下，监测 100nM 的模型 PROTAC 蛋白底物对 HTRF 沙利度胺 - 红色配体与 GST-CRBN 蛋白的解离常数（Kd）的影响。该示例的结果显示，此 PROTAC 蛋白底物对 HTRF 沙利度胺 - 红色配体的解离常数（Kd）无影响。

规格参数

其他规格

兼容自动化：是
品牌：HTRF
检测方式：HTRF
产品类别：荧光试剂
运输条件：干冰运输
技术：时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET）
治疗领域：炎症、神经科学、肿瘤与炎症
单位规格：1 单位

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货号：64BDCRBNRED

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