均相时间分辨荧光(HTRF)肌醇一磷酸(IP-One)检测试剂盒可检测肌醇一磷酸(inositol monophosphate,IP1)的积累情况。肌醇一磷酸是磷脂酶 C(phospholipase C,PLC)信号级联反应激活后,由肌醇三磷酸(IP3)生成的一种稳定下游代谢产物。本试剂盒可直接分析作用于 Gq 偶联受体的各类化合物,适用于贴壁细胞与悬浮细胞两种细胞模型。
从高通量筛选(high-throughput screening,HTS)到构效关系(structure-activity relationships,SAR)研究,肌醇一磷酸(IP-One)检测已被证实相比传统检测方法具有显著优势。
本试剂盒采用竞争结合法设计,包含两种关键成分:一是标记有穴状化合物(供体)的特异性抗体,二是与 d2 荧光团(受体)偶联的肌醇一磷酸(IP1)。细胞自身产生的内源性肌醇一磷酸(IP1)会与 d2 标记的肌醇一磷酸(IP1)竞争结合抗肌醇一磷酸(IP1)铽(Tb²⁺)穴状化合物单克隆抗体。在细胞刺激缓冲液中需添加氯化锂(LiCl),氯化锂可使受体激活后产生的肌醇一磷酸(IP1)在细胞内积累。
肌醇一磷酸(IP-One)检测试剂盒的流程经过简化,仅需两步孵育操作:
- 配体或目标化合物刺激细胞
- 使用 HTRF 试剂检测肌醇一磷酸(IP1)水平
该流程中,细胞经刺激后仅需一次孵育,且孵育时间仅为 1 小时。
肌醇一磷酸(IP-One)检测可确保信号特异性,仅对肌醇一磷酸(IP1)进行定量。肌醇一磷酸(IP1)是唯一由磷脂酶(PLC)作用生成、且通过 G 蛋白偶联受体(GPCR)介导产生的分析物。
相比之下,钙信号反应本质上更为复杂。钙释放常由非 G 蛋白机制触发,包括钙(Ca²⁺)通透性通道、钙泵及钙转运体等。
检测窗口、灵敏度、重复性与特异性:肌醇一磷酸(IP-One)检测在这些关键指标上均表现出色,无任何性能妥协!