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HTRF B-ARRESTIN 2 TOTAL KIT - 100K PTS

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品牌： Revvity

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一、概述（Overview）

β- 抑制蛋白 2（B-arrestin 2）总量检测试剂盒可监测 β- 抑制蛋白 2 的总量，用于检测细胞内源性或过表达的 β- 抑制蛋白 2 的表达水平。β- 抑制蛋白 2 属于 α/β- 抑制蛋白家族成员，已知其参与 G 蛋白偶联受体（G-protein-coupled receptors，GPCRs）介导的脱敏过程，能特异性减弱细胞对激素、神经递质或感觉信号等刺激的反应。由于 β- 抑制蛋白 2 在多种组织中均有表达，研究认为它可能通过调控受体介导的信号通路，在多种癌症及其他人类疾病（如糖尿病）中发挥重要作用。

二、检测原理与操作流程（How it works）

（一）β- 抑制蛋白 2 总量检测原理（Total B-arrestin 2 assay principle）

β- 抑制蛋白 2 总量检测试剂盒通过检测细胞裂解液中 β- 抑制蛋白 2 的表达水平来实现定量分析。与蛋白质印迹法（Western Blot）不同，该检测完全基于微孔板进行，无需凝胶、电泳或转膜步骤。

检测过程使用两种标记抗体：一种偶联供体荧光团，另一种偶联受体荧光团。两种抗体均对 β- 抑制蛋白 2 上的特定表位具有高度特异性。当细胞提取物中存在 β- 抑制蛋白 2 时，加入这两种偶联抗体后，供体荧光团与受体荧光团会因抗体与靶蛋白的结合而相互靠近，进而产生荧光共振能量转移（FRET）信号。该信号强度与样本中 β- 抑制蛋白 2 的浓度直接相关，且整个检测采用 “免洗涤” 模式，为评估蛋白表达水平提供了便捷方法。

（二）β- 抑制蛋白 2 双板检测方案（Total B-arrestin 2 two-plate assay protocol）

使用均相时间分辨荧光（HTRF）试剂检测 β- 抑制蛋白 2 总量时，可在同一块培养板中完成细胞培养、刺激和裂解操作，无需洗涤步骤。该方案专为高通量筛选（HTS）设计，在实现实验微型化的同时，仍能保持稳定可靠的 HTRF 检测质量。

（配图标注：Two-plate protocol of the HTRF total BRD2 assay——HTRF BRD2 总量检测双板方案示意图，注：原文此处靶蛋白名称可能存在笔误，应为 β- 抑制蛋白 2）

（三）β- 抑制蛋白 2 单板检测方案（Total B-arrestin 2 one-plate assay protocol）

使用 HTRF 试剂检测 β- 抑制蛋白 2 总量时，可在同一块培养板中完成细胞培养、刺激和裂解操作，无需洗涤步骤。该方案专为高通量筛选（HTS）设计，在实现实验微型化的同时，仍能保持稳定可靠的 HTRF 检测质量。

三、检测验证（Assay validation）

（一）HTRF β- 抑制蛋白 2 总量检测与蛋白质印迹法（Western Blot）的比较

将人胚肾 293 细胞（HEK293）接种于 T175 培养瓶中，使用完全培养基在 37℃、5% 二氧化碳（CO₂）条件下培养。培养 72 小时后，加入 3 毫升 1× 裂解缓冲液 #4，在室温（RT）下轻轻振荡 30 分钟以裂解细胞。

用裂解缓冲液对细胞裂解液进行系列稀释，取 13 微升（µL）各稀释度的裂解液转移至低体积白色微孔板中，随后加入 3 微升裂解缓冲液和 4 微升 HTRF β- 抑制蛋白 2 总量检测试剂。取等量裂解液分别进行 HTRF 检测和蛋白质印迹法检测，以进行平行对比。

平行对比结果显示，至少在本实验条件下，HTRF 检测的灵敏度是蛋白质印迹法的 4 倍。

（配图标注：1assay-validation-b-arrestin-2-total-1.svg——β- 抑制蛋白 2 总量检测验证示意图 1）

（二）HTRF β- 抑制蛋白 2 总量检测的物种适用性

将人源细胞（HEK293）、仓鼠源细胞（CHO-K1）和鼠源细胞（C2C12）以每孔 10 万个细胞的密度接种到 96 孔板中，使用细胞培养基在 37℃、5% CO₂条件下培养 24 小时。之后移除培养基，加入 50 微升裂解缓冲液，在室温下轻轻振荡 30 分钟以裂解细胞。取 16 微升裂解液转移至 384 孔白色微孔板中，加入 4 微升 HTRF β- 抑制蛋白 2 总量检测试剂，在室温下孵育 3 小时后记录 HTRF 信号。

检测得到的 β- 抑制蛋白 2 表达水平与文献报道数据及对相同细胞进行的实时定量聚合酶链反应（qPCR）实验结果具有良好的相关性。

四、简化信号通路（Simplified pathway）

GPCR 信号通路及 β- 抑制蛋白的作用（Simplified pathway of GPCR signaling and role of B-arrestins）

β- 抑制蛋白通过调控激动剂介导的 GPCR 信号，在 GPCR 信号通路中发挥核心作用。具体而言，β- 抑制蛋白的功能包括：介导受体脱敏与复敏过程；作为丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）通路（如 MAPK1/3 或 AKT1 通路）的信号支架；参与泛素 - 蛋白连接酶向受体的募集。

β- 抑制蛋白是多价衔接蛋白，可使 GPCR 的信号传导模式发生转换 —— 从依赖 G 蛋白的信号模式（从细胞膜传递短期信号）转换为依赖 β- 抑制蛋白的信号模式（当受体内化并在细胞内区室转运时启动一组独特的信号）。

在 GPCR 脱敏过程中，β- 抑制蛋白与 G 蛋白偶联受体激酶（GRK）磷酸化的受体结合，通过空间位阻阻止受体与 G 蛋白结合。

β- 抑制蛋白可作为内吞衔接蛋白，介导多种受体的内化，并将 GPCR 募集到网格蛋白包被小窝中的衔接蛋白 2 复合物（AP-2）中。内化的抑制蛋白 - 受体复合物会转运至细胞内的内体。此外，根据受体类型和细胞类型的不同，抑制蛋白介导的内化方式也存在差异。

受体复敏过程需要移除与受体结合的抑制蛋白，使受体得以去磷酸化并返回细胞膜。

β- 抑制蛋白的参与程度会因受体类型、激动剂种类及细胞类型的不同而存在显著差异。

五、产品规格（Specifications）

其他规格（Other specifications）

项目（Item）	规格（Specification）
应用领域（Application）	蛋白定量（Protein Quantification）
品牌（Brand）	HTRF
检测方式（Detection Modality）	HTRF（均相时间分辨荧光）
分子修饰类型（Molecular Modification）	总量（Total）
产品类别（Product Group）	试剂盒（Kit）
样本体积（Sample Volume）	16 微升（µL）
运输条件（Shipping Conditions）	干冰运输（Shipped in Dry Ice）
靶标类别（Target Class）	G 蛋白偶联受体（GPCR）
靶标物种（Target Species）	人（Human）、小鼠（Mouse）
技术平台（Technology）	TR-FRET（时间分辨荧光共振能量转移）
治疗领域（Therapeutic Area）	心血管疾病（Cardiovascular）、炎症（Inflammation）、代谢 / 糖尿病（Metabolism/Diabetes）、非酒精性脂肪性肝炎 / 纤维化（NASH/Fibrosis）
单位规格（Unit Size）	1000 次检测（1,000 assay points）

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货号：64BAR2TPEJ

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