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当前位置:首页 > 产品中心 > Revvity 均相检测试剂 > HTRF STREPTAVIDIN-D2 - 5K PTS D2标记的链霉亲和素- 5,000测试

概述


链霉亲和素已标记 d2。生物素与链霉亲和素具有高亲和力结合(亲和常数 Ka=10¹⁵M⁻¹),且结合快速稳定,使其成为多种检测(如酶检测、蛋白质 - 蛋白质结合检测和分子生物学检测)的理想选择。


作原理

检测原理

在 HTRF 相互作用检测中,一个结合伙伴直接或间接标记供体,另一个标记受体(同样直接或间接)。信号强度与两个结合伙伴的结合量成正比。


本示例中:链霉亲和素 - d2 结合生物素化的伙伴 A,而伙伴 B * 结合标记 HTRF 供体的特异性抗体。


* 伙伴 B 也可带标签、Fc 融合,此时需使用相应的 HTRF 试剂(抗标签、抗种属、Protein A、链霉亲和素)标记供体进行检测。

检测流程

右侧示例描述了终体积 20 µL 的检测流程,用于检测生物素化标签的伙伴 A 与非标签伙伴 B * 的相互作用:


  1. 加入两种伙伴分子(各 10 µL)并孵育;
  2. 加入链霉亲和素 - d2(5 µL)和供体标记的抗伙伴 B 抗体(5 µL);
  3. 孵育后读取数据。


* 伙伴 B 可带标签、Fc 融合或直接标记,此时需使用相应的 HTRF 试剂(抗标签、抗种属、Protein A、链霉亲和素)标记供体进行检测。


检测详情

为特定应用构建 HTRF 相互作用检测

试剂按检测次数(20 µL 反应体系)销售。XL665 或 d2 偶联物的供应标准为每孔 20 ng 抗体。每瓶试剂的活性成分量(以及每瓶的示踪物数量 —— 参见产品说明书)也会提供。活性成分指偶联物的活性部分(如抗体)。

检测次数与活性成分的关系

每孔的平均偶联物量反映整体生物材料含量。通常优先使用活性成分量而非总偶联物量。对于 Cryptate 和 d2 偶联物,总偶联物量等于活性成分量,因为标记物分子量可忽略不计。但 XL665 标记物不同,其总偶联物量随 XL665 偶联物的最终摩尔比变化,而 Revvity 提供的活性成分量基于订购的检测次数保持恒定。

Cryptate 与 XL665 偶联物的推荐用量

  • Cryptate 偶联物用量不可过量,以免导致读数仪饱和和背景过高。多数情况下,1–5nM 的 Cryptate 浓度合适,根据 HTRF 兼容读数仪不同,可在 620nm 处产生 20,000–80,000 cps 信号。
  • XL665 偶联物需尽可能与检测对应物匹配,以最大化 XL665 受体标记的生物分子数量。例如,检测浓度为 20nM 的标签分子时,抗标签 - XL665 浓度应等摩尔或更高。


规格


其他规格

  • 应用:蛋白质 - 蛋白质相互作用
  • 品牌:HTRF
  • 检测方式:HTRF
  • 产品类别:荧光试剂
  • 运输条件:常温运输
  • 靶标类别:结合检测
  • 技术:TR-FRET(时间分辨荧光共振能量转移)
  • 治疗领域:心血管疾病、感染性疾病、炎症、代谢 / 糖尿病、NASH / 肝纤维化、神经科学、肿瘤与炎症、罕见病
  • 单位规格:5,000 检测点


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