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HTRF MAB ANTI-6HIS TB GOLD - 20K PTS 新6组氨酸Tb测量试剂-20°C,20000测试

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概述

MAb Anti-6HIS-Tb cryptate Gold 是一种单克隆抗体，针对 Tb 标记的多组氨酸标签融合蛋白制备，可识别合成多组氨酸或多组氨酸标签融合蛋白。

该试剂可用于生化和细胞层面的多种相互作用研究，包括：蛋白质 / 蛋白质、蛋白质 / 肽、蛋白质 / DNA、蛋白质 / RNA、蛋白质 / 碳水化合物、蛋白质 / 小分子、受体 / 配体。

HTRF 技术可检测从皮摩尔到低毫摩尔范围的广泛亲和常数。

工作原理

检测原理

在 HTRF 相互作用检测中，一个结合伙伴直接或间接标记供体，另一个标记受体（同样直接或间接）。信号强度与两个结合伙伴的结合量成正比。例如：MAb Anti-6HIS Tb cryptate Gold 结合 6His 标签的伙伴 A，而伙伴 B * 结合标记 HTRF 受体的特异性抗体。* 伙伴 B 也可生物素化、带标签、Fc 融合，此时需使用相应的 HTRF 试剂（抗标签、抗种属、Protein A、链霉亲和素）标记受体进行检测。

检测流程

右侧示例描述了终体积 20 µL 的检测流程，用于检测 6His 标签的伙伴 A 与非标签伙伴 B * 的相互作用：

加入两种伙伴分子（各 10 µL）并孵育；
加入 MAb Anti-6HIS Tb cryptate Gold（5 µL）和受体标记的抗伙伴 B 抗体（5 µL）；
孵育后读取数据。
* 伙伴 B 可生物素化、带标签、Fc 融合或直接标记，此时需使用相应的 HTRF 试剂（抗标签、抗种属、Protein A、链霉亲和素）标记受体进行检测。

检测详情

检测次数与活性成分的关系

每孔的平均偶联物量反映整体生物材料含量。通常优先使用活性成分量而非总偶联物量。对于 Cryptate 和 d2 偶联物，总偶联物量等于活性成分量，因为标记物分子量可忽略不计。但 XL665 标记物不同，其总偶联物量随 XL665 偶联物的最终摩尔比变化，而 Revvity 提供的活性成分量基于订购的检测次数保持恒定。

Cryptate 与 XL665 偶联物的推荐用量

Cryptate 偶联物用量不可过量，以免导致读数仪饱和和背景过高。多数情况下，1–5nM 的 Cryptate 浓度合适，根据 HTRF 兼容读数仪不同，可在 620nm 处产生 20,000–80,000 cps 信号。
XL665 偶联物需尽可能与检测对应物匹配，以最大化 XL665 受体标记的生物分子数量。例如，检测浓度为 20nM 的标签分子时，抗标签 - XL665 浓度应等摩尔或更高。

检测验证

铕与铽抗体在分子互作验证中的应用

根据标签位置不同，不同蛋白质的检测性能可能存在差异。此处平行使用 Revvity 不同的抗 6His 偶联物（Eu、Tb、Eu Gold、Tb Gold）和 Lanthascreen 抗 His 标签抗体（Eu、Tb）。结果表明，根据研究的相互作用不同，可能需要选择不同抗体：某案例中 Eu 抗体表现良好，另一案例中 Tb 效果更佳。在以下每种互作检测中，Revvity Anti6His Gold 偶联物性能均优于 Lanthascreen Anti-6His 标签抗体。

BRD4 (1)-H4 肽互作检测原理

通过偶联物混合液检测 6His 标签的 BRD4 (1) 阅读器结构域与生物素化肽底物 H4 的结合：供体 Cryptate 标记抗 6His 标签抗体，SA-XL665 用于检测生物素化肽。

最佳 H4 肽浓度的确定

肽滴定实验显示，使用 Lanthascreen Eu 或 Tb 抗体供体时无法检测（Tb 标记数据未显示），无法进行化合物筛选。但 Revvity 的 Gold 版和经典版抗 6His 抗体均能检测互作，且 Gold 版可扩大检测窗口。

JQ1 对 BRD4-H4 互作的抑制作用

JQ1 抑制剂的 IC50 在 12–24.5nM 之间，与文献一致。正如预期，新型 Anti-6His cryptate Gold 可扩大检测窗口。

NEFcore/Hck (SH3 结构域) 蛋白互作检测原理

NEFcore 与 HcK SH3 结构域的互作是 HIV 感染性疾病的重要靶点，抑制该互作的抑制剂是潜在治疗方案。使用 3nM 的 Revvity PPI MAb Anti GST-d2 抗体检测 GST 标签融合的 NEFcore，使用 Anti 6His Gold 供体偶联物检测含 6His 标签的 HcK SH3 结构域。

最佳 GST-Nef 浓度的确定

使用 Revvity Anti-6His Tb Cryptate 时无法检测（Eu 结果相同，未显示），而 Gold 版显著扩大检测窗口，支持进一步筛选该蛋白质互作。结果优于使用 Lanthascreen Tb 抗 HIS 标签抗体（Eu 结论相同，未显示）。

FynSH3 对 NEFcore/Hck (SH3 结构域) 互作的抑制作用

使用 FynSH3 蛋白进行抑制剂筛选实验，该蛋白与 Nef Core 结构域结合并竞争 HcK SH3 结构域，IC50 为 0.7–2 µM。使用 Revvity Anti-6His Tb cryptate 时检测窗口略优。

规格

其他规格

应用：蛋白质 - 蛋白质相互作用
品牌：HTRF
检测方式：HTRF
产品类别：荧光试剂
运输条件：常温运输
靶标类别：结合检测
技术：TR-FRET（时间分辨荧光共振能量转移）
治疗领域：心血管疾病、感染性疾病、炎症、代谢 / 糖尿病、NASH / 肝纤维化、神经科学、肿瘤与炎症、罕见病
单位规格：20,000 检测点

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货号：61HI2TLB

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