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HTRF Human CCL17 Kit-500 pts试剂盒

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品牌： Revvity

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概述

人 CCL17，也称为胸腺和活化调节趋化因子（TARC），最初是从植物血凝素刺激的外周血单核细胞中分离得到的。CCL17 在胸腺中组成型表达，在活化状态下，也可在多种细胞类型中表达。CCL17 介导的 Th2 细胞和 CLA⁺CD4⁺T 细胞募集在过敏性疾病（如特应性皮炎、过敏性哮喘、过敏性鼻炎和过敏性接触性皮炎）中起关键作用。此外，在特发性肺纤维化中也检测到了 CCL17。树突状细胞（DCs）分泌的 CCL17 和 CCL22 似乎在慢性肝炎患者中介导调节性 T 细胞募集到炎症部位。

工作原理

HTRF 人 CCL17 检测原理

HTRF 人 CCL17 检测基于时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET）夹心免疫检测法，涉及两种特异性抗体：一种标记 Eu³⁺- 穴状化合物（供体），另一种标记 d2（受体）。两种抗体均针对 CCL17 蛋白，它们与可溶性 CCL17 结合后，供体与受体的近距离接触会产生荧光 TR-FRET 信号。信号强度与样本（细胞上清液）中可溶性 CCL17 的浓度直接成正比。

HTRF 人 CCL17 检测流程

HTRF 人 CCL17 检测可在 96 孔或 384 孔低体积白色检测板中进行（终体积 20 µL）。如本文所述，样本（细胞上清液）或标准品直接加入检测板，再通过 HTRF 试剂检测人 CCL17。标记 HTRF 荧光团的抗体可预先混合后单次加入，无需洗涤步骤。通过按比例调整各添加体积，该流程可进一步微型化或扩大规模。

检测详情

人 CCL17 检测详情

样本量：16 µL
最终检测体积：20 µL
出结果时间：室温下 2 小时
试剂盒组分：冷冻检测抗体、冻干标准品及缓冲液
适用物种：人类，与小鼠蛋白存在部分交叉反应

分析性能

批内精密度表

3 个样本各检测 24 次，计算每个样本的变异系数（% CV）。样本为植物血凝素（PHA）处理的外周血单核细胞（PBMC）上清液。

样本	CCL17 浓度（pg/mL）	变异系数（CV）
1	1874	8.1%
2	924	7.5%
3	501	10.5%
	平均变异系数	8.7%

批间精密度表

每个样本在 3 次独立实验（3 天）中检测，计算每个样本的 % CV。样本为 PHA 处理的 PBMC 上清液。

样本	CCL17 浓度（pg/mL）	变异系数（CV）
1	2,773	8.7%
2	1,231	10.8%
3	647	13.3%
	平均变异系数	11.0%

加标回收率

每个样本在 3 次独立实验（3 天）中检测，计算每个样本的 % CV。样本为添加 CCL17 重组蛋白的 PHA 处理 PBMC 上清液。

加标 IL6（pg/mL）	稀释液 5 回收率	RPMI+10% FBS 回收率
375	103%	99%
250	102%	106%
125	94%	85%

稀释线性

每个样本在 3 次独立实验（3 天）中检测，计算每个样本的 % CV。样本为 PHA 处理的 PBMC 上清液。

样本稀释倍数（x）	预期 CCL17 浓度（pg/mL）	实测 CCL17 浓度（pg/mL）	稀释回收率（%）
未稀释	4217.3	3840.4	91%
1/2	1692.3	1920.2	113%
1/4	813.0	960.1	118%
1/8	426.7	480.1	112%
1/16	236.8	240.0	101%
1/32	135.8	120.0	89%

检测验证

PHA 刺激的 PBMC 细胞密度影响

人 PBMC 在含 10 µg/mL PHA 的 RPMI 培养基中，于 37°C、5% CO₂湿润环境下刺激 24 小时。检测不同细胞密度的影响：在 96 孔板中接种 250、500 和 750 千细胞 / 孔。

刺激 24 小时后收集细胞上清液，取 16 µL 转移至 384 孔（低体积）白色检测板，检测分泌的 CCL17，随后向孔中加入 4 µL HTRF 人 CCL17 检测试剂，2 小时后记录信号。每个上清液样本中的 CCL17 浓度通过 RPMI 中制备的标准曲线外推得到。

结果符合预期：CCL17 的分泌随 PBMC 细胞密度增加而增加。

PHA 对 PBMC 的剂量反应

人 PBMC（750,000 细胞 / 孔，含 RPMI 培养基）在 37°C、5% CO₂湿润环境下，用不同浓度 PHA 刺激 24 小时。

结果符合预期：CCL17 分泌随 PHA 浓度增加而增加，并在约 30 µg/mL 时达到平台期。

IL4 与 LPS 共刺激的协同效应

人 PBMC（750,000 细胞 / 孔，含 RPMI 培养基）分别用 20 ng/mL IL4、2 µg/mL LPS 刺激，或用 IL4 与 LPS 共刺激，置于 37°C、5% CO₂湿润环境中。

刺激 24 小时后收集细胞上清液，取 16 µL 转移至 384 孔（低体积）白色检测板，检测分泌的 CCL17，随后向孔中加入 4 µL HTRF 人 CCL17 检测试剂，2 小时后记录信号。每个上清液样本中的 CCL17 浓度通过 RPMI 中制备的标准曲线内插得到。

结果显示：IL4 可刺激 PBMC 分泌 CCL17，而 LPS 单独刺激无此作用。但 LPS 与 IL4 共刺激存在协同效应，其诱导的 CCL17 分泌量高于 IL4 单独刺激，与文献（《免疫学杂志》（2017）198（9）：3426-3435）一致。

规格

其他规格

应用：蛋白质定量
品牌：HTRF
检测方式：HTRF
动态范围：35.3–4000 pg/mL
检测限：20 pg/mL
定量限：35.3 pg/mL
产品类别：试剂盒
样本体积：16 µL
运输条件：干冰运输
靶标：CCL17
靶标类别：细胞因子
靶标物种：人类
技术：TR-FRET（时间分辨荧光共振能量转移）
治疗领域：炎症
单位规格：500 次检测

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货号：62HCCL17PEG

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