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当前位置:首页 > 产品中心 > Revvity 均相检测试剂 > HTRF HUMAN GRANZYME B KIT - 500 PTS 人颗粒酶B检测试剂盒-500测试

概述


Granzyme B(也称为组织蛋白酶 G 样 1、细胞毒性 T 淋巴细胞蛋白酶 2、Fragmentin-2、Granzyme-2 或人类淋巴细胞蛋白)存在于细胞毒性淋巴细胞、NK(自然杀伤)细胞和细胞毒性 T 细胞中。它与穿孔素一起分泌,穿孔素在细胞膜上形成孔道,Granzyme B 进入靶细胞的细胞质并通过激活胱天蛋白酶触发凋亡。


本试剂盒旨在快速检测细胞上清液和全细胞中的人类 Granzyme B。该检测方法无需任何洗涤步骤即可实现高通量检测,因此与 ELISA 相比节省了时间。


工作原理

检测原理

人类 Granzyme B 检测采用双抗体夹心免疫分析法,涉及两种特异性抗人类 Granzyme B 抗体,分别标记有铕穴状化合物(供体)和 d2(受体)。信号强度与样品中存在的 Granzyme B 浓度成正比。


检测方案

检测方案使用 384 孔小体积白板或 Revvity 小体积 96 孔板(最终体积 20 µL),右侧对其进行了描述。将 16 µL 细胞上清液、样品或标准品直接分配到板中,通过 HTRF 试剂进行检测。标记有 HTRF 供体和受体的抗体可以预先混合,并在单个分配步骤中加入,以进一步简化检测程序。通过简单地按比例调整每个添加体积,该检测可在 96 孔至 384 孔板中进行。


检测详情

Granzyme B 试剂盒的技术规格

  • 样品量:16 µL
  • 最终检测体积:20 µL
  • 试剂盒组件:冻干标准品、冷冻检测抗体、缓冲液和方案
  • 检测限和定量限(在稀释剂中):1.8 ng/mL 和 3.7 ng/mL
  • 范围:3.7 – 1,500 ng/mL
  • 出结果时间:室温下过夜


分析性能

  • Granzyme B 标准曲线:按照试剂盒包装说明书中的程序,将试剂盒中提供的重组 Granzyme B(标准品)在 5 号稀释剂中进行系列稀释。将表示为 delta 比率的 HTRF 信号作为 Granzyme B 浓度的函数作图。
  • 精密度
    • 批内检测(n=24)


样品Granzyme B 平均浓度(pg/mL)CV
164414%
243814%
32318%

平均 CV15%


每个样品测量 24 次,并计算每个样品的 % CV。


  • 批间检测(n=4)


样品Granzyme B 浓度(pg/mL)平均值(deltaRatio)CV
1105769%
25427596%
3652189406%


平均 CV7%


每个样品在 4 个不同的实验中进行测量,并计算每个样品的 % CV。


检测验证

  • 细胞上清液中 Granzyme B 的检测(单平板方案):在 384 孔 sv 微孔板中,将不同细胞密度(4K 和 2K)的 TALL-104 细胞(效应细胞)与或不与 K-562 细胞(靶细胞)在 16µL 悬浮液中共培养。细胞在 37°C - 5% CO2 下孵育 16 小时。共培养后,加入 4 µL HTRF Granzyme B 检测试剂。在室温下过夜孵育后记录 HTRF 信号。
  • 细胞上清液中 Granzyme B 的检测(双平板方案):将不同细胞密度(50K 和 25K)的 TALL-104 细胞(效应细胞)以 50µL 悬浮液接种到 96 孔板中。TALL-104 细胞与或不与 K-562 细胞(靶细胞)共培养 16 小时,温度为 37°C - 5% CO2。共培养后,将 16µL 细胞上清液转移到 384 孔 sv 白色微孔板中,并加入 4 µL HTRF Granzyme B 检测试剂。在室温下过夜孵育后记录 HTRF 信号。


规格


其他规格

  • 应用:蛋白质定量
  • 品牌:HTRF
  • 检测方式:HTRF
  • 产品类别:试剂盒
  • 样品体积:16 µL
  • 运输条件:干冰运输
  • 目标类别:生物标志物
  • 目标物种:人类
  • 技术:TR-FRET
  • 治疗领域:肿瘤学和炎症
  • 单位规格:500 个检测点


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