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HTRF ANDRO RECEPTOR KIT - 10K PTS 人雄激素受体检测试剂盒 - 10000测试

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概述

HTRF 人雄激素受体检测试剂盒可监测野生型雄激素受体（AR-WT）和雄激素受体剪接变体 7（AR-V7），用于检测各类细胞中内源性或过表达的雄激素受体的表达情况。

雄激素受体是一种核受体，可被雄激素（如睾酮（T）和二氢睾酮（DHT））激活。

雄激素与雄激素受体的配体结合域结合，导致受体同源二聚化并转运至细胞核。这会激活下游基因表达和信号通路（如 PI3K/AKT 通路）的激活。雄激素受体诱导的基因表达会引发细胞分裂、增殖、分化、凋亡和血管生成。雄激素受体通路的失调可能导致致癌表型，且雄激素受体的激活或过表达已被广泛证实与前列腺癌以及其他类型癌症（如乳腺癌和胶质母细胞瘤）相关。此外，雄激素受体变体在多种人类癌细胞系中均有表达。雄激素受体变体 7（AR-V7）是雄激素受体 mRNA 的一种剪接变体，其配体结合域发生截断，具有组成型活性，且在人类癌细胞系中广泛表达。因此，雄激素受体已成为制药行业的重要药物靶点。开发靶向雄激素受体降解的 PROTAC 化合物是针对雄激素受体阳性癌症的治疗策略之一。

工作原理

HTRF 人雄激素受体检测试剂盒原理

HTRF 人雄激素受体检测试剂盒可对细胞裂解物中雄激素受体的表达水平进行定量分析。与蛋白质印迹法（Western Blot）不同，该检测完全基于微孔板进行，无需凝胶、电泳或转膜步骤。人雄激素受体检测采用两种标记抗体：一种偶联供体荧光团，另一种偶联受体荧光团。两种抗体均对该蛋白上的特定表位具有高度特异性。当细胞提取物中存在雄激素受体时，加入这些偶联物会使供体荧光团与受体荧光团靠近，从而产生 FRET 信号。信号强度与样品中蛋白质的浓度直接相关，且该检测采用免洗涤格式，为评估蛋白质表达提供了便捷方式。

1phospho-how-it-works-human-androgen-receptor-assay-principle.svg（人雄激素受体检测原理示意图）

人雄激素受体双板检测方案

双板方案包括：先在 96 孔板中培养细胞，然后裂解细胞，再将裂解物转移至 384 孔低体积检测板中，最后加入人雄激素受体 HTRF 检测试剂。该方案能够监测细胞的活力和汇合度。

2biomarkers-how-it-works-assay-protocol-alpha-tubulin-63adk072peg-63adk072peh.svg（人雄激素受体双板检测方案示意图）

人雄激素受体单板检测方案

使用 HTRF 试剂检测人雄激素受体可在单个培养板中完成，该培养板同时用于细胞培养、刺激和裂解。无需洗涤步骤。这种为高通量筛选（HTS）设计的方案可实现小型化，同时保持稳定的 HTRF 检测质量。

2phospho-how-it-works-total-btk-1-plate-assay-protocol.svg（人雄激素受体单板检测方案示意图）

检测验证

HTRF 与蛋白质印迹法监测人雄激素受体的降解情况

对比了通过蛋白质印迹法和 HTRF 人雄激素受体试剂盒监测 ARCC-4 PROTAC 化合物对雄激素受体的剂量依赖性降解效果。将人前列腺癌细胞系 LNCaP 以每孔 75,000 个细胞的密度接种到 96 孔培养处理板中，使用完全培养基，在 37°C、5% CO₂条件下孵育过夜。用 ARCC-4 PROTAC 化合物处理细胞，浓度范围为 5nM 至 10,000nM，处理时间为 24 小时。处理后，加入 50µL 补充的 3 号裂解缓冲液，在室温下轻轻振荡 30 分钟裂解细胞。对于人雄激素受体试剂盒的检测步骤，将 16µL 细胞裂解物转移至 384 孔低体积白色微孔板中，然后加入 4µL HTRF 人雄激素受体检测试剂。孵育 2 小时后记录 HTRF 信号。HTRF 人雄激素受体试剂盒测定得出，ARCC-4 PROTAC 化合物在 LNCaP 细胞中降解人雄激素受体的 DC50（50% 的靶蛋白被降解时的浓度）为 900nM。通过蛋白质印迹法评估了 ARCC-4 PROTAC 化合物对 LNCaP 细胞中表达的 AR-WT 和 AR-V7 两种形式的降解情况。结果表明，只有 AR-WT 会被 ARCC-4 PROTAC 化合物降解，这也解释了为何能够同时检测两种形式的 HTRF 人雄激素受体试剂盒所监测到的降解是部分降解。HTRF 人雄激素受体试剂盒与蛋白质印迹法所测定的 ARCC-4 PROTAC 化合物在 LNCaP 细胞中降解人雄激素受体的 DC50 值一致。

2assay-validation-human-androgen-receptor-4.svg（验证示意图 1）
3assay-validation-human-androgen-receptor-5.svg（验证示意图 2）

HTRF 人雄激素受体检测与蛋白质印迹法的比较

将人乳腺癌细胞在 T175 培养瓶中，使用完全培养基，在 37°C、5% CO₂条件下培养 48 小时。加入 3mL 补充的 3 号裂解缓冲液，在室温下轻轻振荡 30 分钟裂解细胞。使用补充的裂解缓冲液对细胞裂解物进行系列稀释，将 16µL 各稀释液转移至低体积白色微孔板中，然后加入 4µL HTRF 人雄激素受体检测试剂。取等量裂解物，采用 HTRF 与蛋白质印迹法进行平行比较。使用 HTRF 人雄激素受体检测试剂盒时，每孔 1,500 个细胞即可检测到显著信号，而使用蛋白质印迹法则需要 6,500 个细胞才能获得最低化学发光信号。因此，在该条件下，HTRF 人雄激素受体检测试剂盒的灵敏度是蛋白质印迹法的 4.5 倍。

4assay-validation-human-androgen-receptor-6.svg（比较示意图）

简化通路

雄激素受体信号通路

雄激素受体（AR）是一种核受体，可被雄激素（如睾酮（T）和二氢睾酮（DHT））激活。雄激素穿过细胞膜直接与雄激素受体结合，诱导雄激素受体发生同源二聚化并转运至细胞核。随后，雄激素受体二聚体与雄激素应答元件（ARE）结合，从而启动基因表达，进而引发细胞分裂、增殖、分化、凋亡和血管生成。

5phospho-pathway-human-androgen-receptor.svg（雄激素受体信号通路示意图）

规格参数

其他规格

应用领域：细胞信号传导
兼容自动化：是
品牌：HTRF
检测方式：HTRF
兼容的裂解缓冲液：2 号裂解缓冲液、3 号裂解缓冲液
产品类别：试剂盒
样品体积：16µL
运输条件：干冰运输
靶标类别：磷蛋白
靶标物种：人
技术：时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET）
治疗领域：肿瘤学与炎症
单位规格：10,000 个检测点

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货号：64ANDRPEH

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