HTRF A-TUBULIN HOUSE. KIT - 10K PTS α微管蛋白试剂盒 - 10，000测试

概述

工作原理

α- 微管蛋白管家检测原理

α- 微管蛋白管家双板检测方案

检测验证

1. 对不同物种和组织类型的贴壁细胞系的验证
   人细胞系（HEK293、HeLa、SH-SY5Y、LX-2 * 和 IMR-90）、小鼠细胞系（NIH/3T3 和 C2C12）以及仓鼠细胞系 CHO 以不同细胞密度接种于 96 孔培养板中，在 37°C、5% CO₂条件下孵育 24 小时。然后用 50 µL 补充的 4 号裂解缓冲液在室温下轻轻振荡 30 分钟裂解细胞，将 4 µL 细胞裂解物（未稀释或在补充的裂解缓冲液中预稀释）转移至低体积白色微孔板中。进行 HTRF 检测时，加入 12 µL 试剂盒稀释液，随后加入 4 µL 预混合的检测抗体。室温孵育过夜后记录 HTRF 信号。

2. 对悬浮细胞系和原代细胞的验证
   将人淋巴母细胞系 Jurkat 和 TK6 以及从人血样中分离的外周血单核细胞（PBMCs）以不同细胞密度接种于半块 96 孔板中（体积不足 30 µL），直接用 10 µL 补充的 4 号裂解缓冲液（4X）在室温下轻轻振荡 30 分钟裂解。进行 HTRF 检测时，将 4 µL 未稀释的细胞裂解物转移至低体积白色微孔板中，加入 12 µL 试剂盒稀释液，然后加入 4 µL 预混合的检测抗体。室温孵育过夜后记录 HTRF 信号。该检测也适用于 T 淋巴母细胞系、B 淋巴母细胞系和外周血单核细胞的常规细胞密度，无需预稀释细胞裂解物。

3. 对组织样品的验证
   使用 3 号裂解缓冲液制备三只饮食诱导型非酒精性脂肪性肝炎（DIN）小鼠 * 的肝脏组织裂解物，并按照技术说明《优化组织上的 HTRF® 细胞信号传导检测》进行分析。总蛋白定量后，将样品调整至相同浓度，并在补充的裂解缓冲液中进行系列稀释。进行 HTRF 检测时，将 4 µL 每种组织裂解物稀释液转移至低体积白色微孔板中，加入 12 µL 试剂盒稀释液，然后加入 4 µL 预混合的检测抗体。室温孵育过夜后记录 HTRF 信号。α- 微管蛋白管家检测与组织裂解物兼容，检测范围适用于低、中、高浓度蛋白质的样品。*DIN 小鼠肝脏样品由临床前合同研究组织 Physiogenex（法国拉贝日）友情提供。

4. 与 BCA 蛋白检测的相关性
   按照第 1 部分的描述，制备以不同细胞密度接种于 96 孔培养板中 24 小时的人和小鼠细胞系的裂解物。按照前一部分的描述，制备来自饮食诱导型非酒精性脂肪性肝炎（DIN）和甲硫氨酸 - 胆碱缺乏（MCD）小鼠 * 的肝脏组织裂解物的系列稀释液。通过 HTRF 检测管家蛋白 α- 微管蛋白时，将 4 µL 细胞或组织裂解物转移至低体积白色微孔板中，然后加入 12 µL 试剂盒稀释液和 4 µL 预混合的检测抗体。同时，根据制造商的说明，使用 BCA 蛋白检测（QuantiPro BCA 检测试剂盒，Sigma-Aldrich）测定相同裂解物中的蛋白质浓度。对于两种方法（HTRF 或 BCA），均对裂解物进行未稀释或在适当缓冲液中预稀释处理，以便在每个试剂盒的线性范围内进行检测。每个图表上每个点旁边都标注了用于相关性分析的细胞密度。

简化通路

α- 微管蛋白简化通路

规格

• 应用：蛋白质定量
• 品牌：HTRF
• 检测方式：HTRF
• 裂解缓冲液兼容性：1 号裂解缓冲液、2 号裂解缓冲液、3 号裂解缓冲液、4 号裂解缓冲液、5 号裂解缓冲液
• 产品类别：试剂盒
• 样品体积：4 µL
• 运输条件：干冰运输
• 靶标类别：生物标志物
• 技术：时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET）
• 治疗领域：心血管疾病、感染性疾病、代谢 / 糖尿病、非酒精性脂肪性肝炎 / 纤维化、神经科学、肿瘤与炎症、罕见病
• 单位规格：10,000 个检测点