HTRF HU. H232 STING BIND. KIT - 10K PTS

产品概述

一种快速简便的方法，用于识别与人类 H232 STING 新型结合物。

干扰素基因刺激因子（STING），又称跨膜蛋白173（TMEM173），是在先天免疫中发挥关键作用的一种蛋白。

H232 变体在全球约 13.7% 的人群中存在。当病毒和细菌等病原体释放胞内胞质 DNA 后，2'-3'cGAMP 会结合 STING 蛋白，触发 I 型干扰素的分泌。然而，已知 H232 变体与 2'-3'cGAMP 及其他天然二核苷酸的结合能力较弱。因此，寻找对所有基因变体均有效的分子，已成为调节自身炎症性疾病免疫反应的关键。

相较于其他技术，HTRF（均相时间分辨荧光）检测方案具有诸多优势：

• 均相“加样-读取”模式

• 无需洗涤步骤

• 背景信号低

• 可直接从 96 或 384 孔微板小型化至 384 孔低容量及 1536 孔等高密度检测规格

• 信号稳定，为读取时间或检测规模提供灵活的操作窗口

工作原理

检测原理
HTRF H232 STING 结合检测试剂盒采用竞争性检测模式，使用 d2 标记的 H232 STING 配体、带有 6His 标签的人源 H232 STING 蛋白，以及抗 6His 穴状化合物标记的抗体。您的待测化合物会与 H232 STING 配体-d2 竞争，从而阻止 FRET（荧光共振能量转移）的发生。

检测方案

本试剂盒可在 96 孔或 384 孔低容量白色微孔板（终体积 20 µL）中运行。操作流程如下：将样品或标准品直接分装至检测板中，随后加入人源 His 标签 H232 STING 蛋白，接着分装 HTRF 检测试剂（即铽穴状化合物标记的抗 6His 抗体，以及 d2 标记的 H232 STING 配体）。HTRF 荧光基团标记的试剂可预先混合并在单个分装步骤中添加。整个过程无需洗涤步骤。该方案还可通过按比例调整各添加体积，实现进一步的小型化或放大化。

检测验证

化合物筛选
将已知作为 STING 配体的多种化合物加入检测体系中。

与 2'3'cGAMP 对野生型（WT）STING 的高亲和力（Ki = 2.5 nM）相比，其对 H232 变体表现为 µM 级别的低亲和力。同样，其他细菌来源化合物（如 3'3' cGAMP、环二腺苷酸（cyclic di-AMP）和环二鸟苷酸（cyclic d-GMP））以及参考化合物 ADU-S100，其 Ki 常数均在 µM 级别。

而对应于标记配体衍生物的检测标准品则表现出更强的结合效力，其 Ki 值为 13.4 nM。

DMXAA（一种非特异性化合物，同时也是众所周知的鼠源 STING 结合物）对该检测体系无任何影响，从而证实了该试剂盒的人类特异性。

简化通路

STING 信号通路概述
STING（干扰素基因刺激因子）是一种定位于内质网的细胞质同源二聚体蛋白，在先天免疫中扮演重要角色。当病原体感染或细胞凋亡过程中线粒体皱缩时，游离的双链 DNA（dsDNA）会结合并激活 DNA 传感器——环状 GMP-AMP 合酶（cGAS）。被激活的 cGAS 催化生成 2'-3'cGAMP（一种环状二核苷酸），后者随即结合 STING 蛋白。随后，被磷酸化的 STING 与 TANK 结合激酶 1（TBK1）相互作用，导致活性干扰素调节因子 3（IRF3）二聚体的募集和激活。IRF3 二聚体转位至细胞核，启动编码 IFN-α/β 的基因转录。此外，STING 通路还调控 NF-κB 依赖性炎性细胞因子的表达。作为一种负反馈调节环路，DNA 刺激的 cGAS-STING-TBK1 通路还会通过 p62/SQSTM1 相关的自噬作用触发 STING 蛋白降解，从而关闭 IFNb 的产生。

技术规格