HTRF MOUSE STING WT BIND. KIT - 10K PTS

产品概述

一种快速简便的方法，用于识别与小鼠STING WT（野生型）的新型结合物。

干扰素基因刺激因子（STING），又称跨膜蛋白173（TMEM173），是在先天免疫中发挥关键作用的一种蛋白。当病毒和细菌等病原体释放胞内胞质DNA后，2‘-3’cGAMP会结合STING蛋白，触发I型干扰素的分泌。因此，识别新型STING配体成为调控免疫应答、对抗自身炎症性疾病的重要途径。

相较于其他技术，HTRF（均相时间分辨荧光）检测方案具有诸多优势：

• 均相“加样-读取”模式

• 无需洗涤步骤

• 背景信号低

• 可直接从96或384孔微板小型化至384孔低容量及1536孔等高密度检测规格

• 信号稳定，为读取时间或检测规模提供灵活的操作窗口

工作原理

检测原理
HTRF STING结合检测试剂盒采用竞争性检测模式，使用d2标记的STING配体、带有6His标签的小鼠STING蛋白，以及抗6His穴状化合物标记的抗体。您的待测化合物会与STING配体-d2竞争，从而阻止FRET（荧光共振能量转移）的发生。

检测方案
本试剂盒可在96孔或384孔低容量白色微孔板（终体积20 µL）中运行。操作流程如下：将样品或标准品直接分装至检测板中，随后加入小鼠His标签STING蛋白，接着分装HTRF检测试剂（即铽穴状化合物标记的抗6His抗体，以及d2标记的STING配体）。HTRF荧光基团标记的试剂可预先混合并在单个分装步骤中添加。整个过程无需洗涤步骤。该方案还可通过按比例调整各添加体积，实现进一步的小型化或放大化。

检测验证

化合物筛选
将已知作为STING配体的多种化合物加入检测体系中。

2‘3’cGAMP对小鼠STING蛋白表现出nM级别的高亲和力。其他细菌来源化合物，如环二腺苷酸（cyclic di-AMP）和环二鸟苷酸（cyclic di-GMP），其亲和力在数十nM级别。

DMXAA和CMA——两种已知的小鼠STING特异性化合物——能够竞争性置换标记配体，其Ki值与文献报道高度吻合。

简化通路

STING信号通路概述
STING（干扰素基因刺激因子）是一种定位于内质网的细胞质同源二聚体蛋白，在先天免疫中扮演重要角色。当病原体感染或细胞凋亡过程中线粒体皱缩时，游离的双链DNA（dsDNA）会结合并激活DNA传感器——环状GMP-AMP合酶（cGAS）。被激活的cGAS催化生成2‘-3’cGAMP（一种环状二核苷酸），后者随即结合STING蛋白。随后，被磷酸化的STING与TANK结合激酶1（TBK1）相互作用，导致活性干扰素调节因子3（IRF3）二聚体的募集和激活。IRF3二聚体转位至细胞核，启动编码IFN-α/β的基因转录。此外，STING通路还调控NF-κB依赖性炎性细胞因子的表达。作为一种负反馈调节环路，DNA刺激的cGAS-STING-TBK1通路还会通过p62/SQSTM1相关的自噬作用触发STING蛋白降解，从而关闭IFNβ的产生。

技术规格