HTRF HUMAN VHL BIND. KIT - 500 PTS HTRF人VHL蛋白结合检测试剂盒 - 500测试

产品概述

一种快速简便的方法，用于识别与VHL蛋白的新型结合物。

VHL，即von Hippel-Lindau蛋白，参与多种生物学过程，与血管生成、细胞生长及细胞存活的调控密切相关。

VHL是双功能蛋白降解靶向嵌合体（PROTAC）分子最常招募的E3泛素连接酶之一，用于诱导目标蛋白的泛素化及随后的蛋白酶体降解。

VHL与多种蛋白相互作用，形成具有功能的von Hippel-Lindau泛素化复合物。在该复合物中，VHL充当E3泛素连接酶复合物的靶标募集亚基，在常氧条件下将羟化的缺氧诱导因子（HIF）等多种蛋白靶向至蛋白酶体进行降解。

因此，识别新型PROTAC VHL配体有助于改善对目标蛋白的选择性蛋白酶体依赖性降解，这些蛋白参与癌症等疾病的发生发展。

工作原理

检测原理
HTRF人源VHL结合检测试剂盒采用竞争性检测模式，使用VHL-Red配体作为VHL配体、带有6His标签的人源VHL蛋白复合物，以及抗6His铕穴状化合物标记的抗体。VHL结合化合物会与VHL-Red配体竞争，从而阻止FRET（荧光共振能量转移）的发生。

检测方案
本试剂盒可在96孔或384孔低容量白色微孔板（终体积20 µL）中运行。操作流程如下：将样品或标准品直接分装至检测板中，随后加入6His标签VHL蛋白复合物，接着分装HTRF检测试剂（即铕穴状化合物标记的抗6His抗体，以及红色HTRF受体标记的VHL配体）。HTRF荧光基团标记的试剂可预先混合并在单个分装步骤中添加。整个过程无需洗涤步骤。该方案还可通过按比例调整各添加体积，实现进一步的小型化或放大化。

检测验证

VHL正构配体的筛选
对两种VHL配体进行了表征。

VH-032（检测标准品）和VH-298表现出与文献报道高度吻合的预期效力。不相关化合物来那度胺（Lenalidomide，Cereblon配体）不能与VHL-Red配体竞争结合，证明了HTRF VHL结合检测试剂盒的特异性。

PROTAC化合物（基于VHL配体）的筛选

对四种基于VHL配体的PROTAC化合物（CRBN-6-5-5-VHL、TBK1、CM 11和ARV-771）进行了表征。所有化合物均表现出与文献报道高度吻合的正确药理学排序。

DMSO对检测性能的影响

测试了不同百分比的DMSO（孔内终浓度从0.1%至2%）。结果表明，随着DMSO百分比的增加，检测窗口有所降低，但药理学表现保持稳定。

技术规格