HTRF CTLA4/CD80 BIND. KIT - 10K PTS

产品概述

CTLA4（细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4），又称CD152，是一种由T细胞表达的免疫应答抑制分子。CTLA4与CD28（刺激性检查点）拥有共同的配体，即CD80（B7.1）和CD86（B7.2），且CTLA4对这两种配体的亲和力均高于CD28，从而形成有效的配体结合竞争。尽管CTLA4可见于所有T细胞，但主要表达于Treg细胞（调节性T细胞），参与其介导的免疫应答抑制功能。

相较于其他技术，HTRF（均相时间分辨荧光）检测方案具有诸多优势：

• 均相“加样-读取”模式

• 无需洗涤步骤

• 背景信号低

• 可直接从96或384孔微板小型化至384孔低容量及1536孔等高密度检测规格

• 信号稳定，为读取时间或检测规模提供灵活的操作窗口

工作原理

检测原理
CTLA4/CD80结合检测试剂盒包含带标签的人源重组免疫检查点配对蛋白（CTLA4和CD80（即B7.1））以及用于HTRF检测的标记抗标签试剂。在无抑制剂的情况下，CTLA4与CD80结合，各检测试剂与其对应标签蛋白的结合产生HTRF信号。在待测化合物、标准品或阻断CTLA4/CD80相互作用的抗体存在时，HTRF信号随之降低。

检测方案
本试剂盒可在96孔或384孔低容量白色微孔板（终体积20 µL）中运行。操作流程如下：将样品或标准品直接分装至检测板中，随后加入带标签的CTLA4和CD80蛋白，接着分装HTRF检测试剂。HTRF荧光基团标记的试剂可预先混合并在单个分装步骤中添加。整个过程无需洗涤步骤。该方案还可通过按比例调整各添加体积，实现进一步的小型化或放大化。

检测验证

阻断抗体的抑制效应
分别测试了七种靶向CTLA4、CD80、CD86和PD-1的抗体的抑制效应。两种抗CTLA4抗体（伊匹木单抗，Ipilimumab和L3D10）均显示出对相互作用的抑制，IC₅₀值分别为1.1 nM和2.7 nM。抗CD80抗体（MAB140和2D10）同样破坏了该相互作用，IC₅₀分别为0.30 nM和11.5 nM。抗CD86抗体和纳武利尤单抗（Nivolumab，抗PD-1）未显示任何抑制效应，这与预期一致。

CTLA4/CD80标准品的抑制效应
将试剂盒中提供的CTLA4/CD80标准品储备液进行5倍梯度稀释，制备8点剂量响应曲线。按照检测方案所述，将标准品分装至检测板中，随后加入带标签的CTLA4和CD80蛋白，接着分装HTRF检测试剂。图中数据表明CTLA4/CD80相互作用受到抑制，IC₅₀为1.0 nM。

技术规格