HTRF FGFR2 P-Y653/654 KIT - 500 PTS 成纤维细胞生长因子受体磷酸化Y653/654测量试剂盒 - 500测试

磷酸化 FGFR2 检测试剂盒旨在对 FGFR2 的调节进行可靠定量，检测其在酪氨酸 653 / 酪氨酸 654 位点的磷酸化情况，以此作为丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）和磷脂酰肌醇 3 激酶 / 蛋白激酶 B（PI3/AKT）信号通路的读数。FGFR2 的突变与癌症（如乳腺癌、黑色素瘤）以及骨骼发育异常（如颅缝早闭综合征）相关。

规格

• 应用领域：细胞信号传导
• 品牌：HTRF
• 检测方式：均相时间分辨荧光（HTRF）
• 裂解缓冲液兼容性：裂解缓冲液 2、裂解缓冲液 3、裂解缓冲液 4、裂解缓冲液 5
• 分子修饰类型：磷酸化
• 产品类别：试剂盒
• 样本体积：16 微升
• 运输条件：干冰运输
• 作用靶点类别：磷酸化蛋白
• 作用靶点物种：人类
• 技术：时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET）
• 治疗领域：肿瘤与炎症、罕见病
• 包装规格：500 个检测点

磷酸化 FGFR2（酪氨酸 653/654 位点）检测原理

双板检测方案包括先在 96 孔板中培养细胞，细胞裂解后，将裂解物转移到 384 孔低体积检测板中，然后再加入磷酸化 FGFR2（酪氨酸 653/654 位点）HTRF 检测试剂。该方案能够监测细胞的活力和汇合度。

磷酸化 FGFR2（酪氨酸 653/654 位点）单板检测方案

评估不同人源癌细胞系中 FGFR 蛋白水平

将人源 SNU-16 细胞（胃癌细胞）以每孔 100,000 个细胞的密度接种于半面积 96 孔经细胞培养处理的培养板中，加入 25 微升完全培养基。在 37°C、5% 二氧化碳的条件下，用 5 微升浓度递增的 FGFR 抑制剂 AZD4547 处理细胞 6 小时。处理后，在室温下轻柔摇晃，用 10 微升补充后的裂解缓冲液 #4（4 倍稀释液）裂解细胞 30 分钟。

细胞裂解后，将 16 微升裂解物转移到 384 孔低体积白色微孔板中，加入 4 微升 HTRF 磷酸化 FGFR2（酪氨酸 653/654 位点）或总 FGFR2 检测试剂。在室温下孵育过夜后记录 HTRF 信号。

正如预期的那样，得到的结果显示，在用 AZD4547 处理后，FGFR2 酪氨酸 653/654 位点的磷酸化水平呈剂量反应性抑制，而 FGFR2 的表达水平保持不变。

使用磷酸化 FGFR2（酪氨酸 653/654 位点）和总 FGFR2 试剂盒在 Kato-III 细胞中检测抑制作用

将人源 NCI-H716 细胞（结直肠腺癌）以每孔 100,000 个细胞的密度接种于 96 孔板中，孵育过夜。在 37°C、5% 二氧化碳的条件下，用不同剂量的 AZD4547 处理细胞 6 小时。处理后，在室温下轻柔摇晃，用 50 微升补充后的裂解缓冲液 #4（1 倍稀释液）裂解细胞 30 分钟。

细胞裂解后，将 16 微升裂解物转移到 384 孔低体积白色微孔板中，加入 4 微升 HTRF 磷酸化 FGFR2（酪氨酸 653/654 位点）或总 FGFR2 检测试剂。在室温下孵育过夜后记录 HTRF 信号。

正如预期的那样，得到的结果显示，在用 AZD4547 处理后，FGFR2 酪氨酸 653/654 位点的磷酸化水平呈剂量反应性抑制，而 FGFR2 的表达水平保持不变。

HTRF 磷酸化 FGFR2（酪氨酸 653/654 位点）检测方法与蛋白质免疫印迹法（Western Blot）的比较