品牌: Revvity
产品概述
本试剂盒可在蛋白生产和纯化的各阶段快速检测带有6His标签的融合蛋白。它既可用于确认融合蛋白的6His基序是否可被抗6His抗体识别,也可用于估算6His标签蛋白的浓度。
通过使用合适的蛋白进行校准,该检测具有很高的准确性,且与标准操作规程(SOPs)兼容。它还可用于排除假阳性结果,并预测使用镍柱纯化该蛋白的可行性:使用本检测试剂盒无法检出的标签将无法用于纯化。
工作原理
检测原理
如图所示,XL665标记的6His肽段可被抗6His穴状化合物偶联物(抗标签穴状化合物)检测。待测的6His标签融合蛋白与6His肽段-XL665偶联物竞争结合抗6His-穴状化合物偶联物。特异性信号与6His标签融合蛋白的浓度成反比。
检测方案
右侧示例描述的是终体积20 µL的检测方案。向孔中依次加入10 µL标准品或待测6His标签蛋白、5 µL 6His-铕穴状化合物偶联物和5 µL 6His-XL665偶联物。室温孵育2小时后读取信号。
检测验证
6His检测试剂盒Gold版对多种6His标签蛋白的检测性能
6His检测试剂盒Gold版能够检测6His标签蛋白,无论其分子量大小及6His标签的插入位置(N端、C端及内部6His标签)如何。不同融合蛋白的6His标签检测信号存在差异。
对于样品中6His标签蛋白的定量测定,我们建议使用内部校准品(与待测6His标签蛋白相近的6His融合蛋白)。
6His-MBP-GST-Flag和THX-6His-1509V3蛋白由Hybrigenics公司惠赠。
| 标签位置 | 6His标签蛋白 | 分子量(Da) | 定量限或IC₁₀(nM) | IC₅₀(nM) |
|---|---|---|---|---|
| N端 | 6His-肽段 | 1,300 | 4.2 | 32.8 |
| 6His-BRD4(1) | 17,800 | 17.6 | 105.0 | |
| 6His-SNAP | 20,600 | 31.4 | 244.8 | |
| 6His-MBP-GST-Flag* | 64,000 | 3.2 | 28.0 | |
| 内部 | THX-6His-1509V3* | 27,000 | 3.0 | 24.8 |
| C端 | 6His标签纳米抗体 | 15,000 | 2.9 | 24.48 |
技术规格
| 项目 | 详情 |
|---|---|
| 应用 | 蛋白质-蛋白质相互作用(Protein-Protein Interaction) |
| 自动化兼容 | 是(Yes) |
| 品牌 | HTRF |
| 检测方式 | HTRF |
| 产品组别 | 试剂盒(Kit) |
| 样本体积 | 10 µL |
| 运输条件 | 干冰运输(Shipped in Dry Ice) |
| 靶点 | 6His |
| 靶点类别 | 结合检测(Binding Assay) |
| 技术平台 | TR-FRET(时间分辨荧光共振能量转移) |
| 疗法领域 | 心血管(Cardiovascular)、感染性疾病(Infectious Diseases)、炎症(Inflammation)、代谢/糖尿病(Metabolism/Diabetes)、NASH/纤维化(NASH/Fibrosis)、神经科学(Neuroscience)、肿瘤学与炎症(Oncology & Inflammation)、罕见病(Rare Diseases) |
| 单位规格 | 500个检测点(500 assay points) |