当前位置：首页 > 产品中心 > Revvity 均相检测试剂 > HTRF(h/m) Total IKZF1 Kit-500 pts 人源/鼠源总IKAROS家族锌指蛋白1检测试剂盒，500测试

HTRF(h/m) Total IKZF1 Kit-500 pts 人源/鼠源总IKAROS家族锌指蛋白1检测试剂盒，500测试

分享给好友

rvty_ls_sds_64IKZF1TPEG_FRA rvty_ls_sds_64IKZF1TPEG_DEU rvty_ls_sds_64IKZF1TPEG_ELL rvty_ls_sds_64IKZF1TPEG_ITA rvty_ls_sds_64IKZF1TPEG_SPA rvty_ls_sds_64IKZF1TPEG_UK rvty_ls_sds_64IKZF1TPEG_US

收藏咨询

品牌： Revvity

产品详情
相关解决方案
相关资源
相关视频
相关问答

概述

Ikaros 锌指（IKZF）家族转录因子是淋巴细胞生成的关键调节因子。IKZF1（Ikaros）和 IKZF3（Aiolos）在 T 细胞和 B 细胞分化过程中以及成熟细胞的功能中既作为转录抑制因子，也作为转录激活因子发挥作用。Ikaros 家族蛋白与多种复合物（包括 NuRD、PRC2 和转录延伸因子）结合，通过这些关联调节基因表达谱和染色质状态。这些蛋白的过表达与癌细胞（如恶性浆细胞和多发性骨髓瘤）的增殖和存活维持相关。

在已研究的抗癌治疗策略中，免疫调节酰亚胺药物（IMIDs）及其衍生物 —— cereblon E3 连接酶调节药物（CELMoDs）的应用已成为一种热门策略。这些化合物通过与 CRBN 结合，诱导靶蛋白泛素化并促进其降解。靶向 IKZF1 和 IKZF3 的 CELMoDs 在多发性骨髓瘤细胞模型中显示出良好的抗肿瘤活性。

工作原理

总 IKZF1 检测原理

HTRF 总 IKZF1 检测用于定量细胞裂解物中 IKZF1 的表达水平。与蛋白质印迹法（Western Blot）不同，该检测完全基于微孔板，无需凝胶、电泳或转膜步骤。总 IKZF1 检测使用两种标记抗体：一种偶联供体荧光团，另一种偶联受体荧光团。两种抗体均对蛋白质上的不同表位具有高特异性。当细胞提取物中存在 IKZF1 时，添加这些偶联物会使供体荧光团与受体荧光团近距离接触，从而产生 FRET 信号。信号强度与样本中蛋白质的浓度直接成正比，且无需洗涤步骤即可评估蛋白质的表达水平。

总 IKZF1 双板检测流程

双板流程包括：在 96 孔板中培养细胞，裂解后将裂解物转移至 384 孔低体积检测板，再添加总 IKZF1 HTRF 检测试剂。该流程可监测细胞活力和汇合度。

总 IKZF1 单板检测流程

使用 HTRF 试剂检测总 IKZF1 可在同一板中完成细胞培养、刺激和裂解，无需洗涤步骤。这种高通量筛选（HTS）设计的流程可实现微型化，同时保持稳定的 HTRF 检测质量。

检测验证

使用 IMID 和 CELMoDs 在 Ramos 细胞中调节 HTRF 总 IKZF1

将 Ramos 细胞接种于 96 孔培养板（50,000 个细胞 / 30µL / 孔），并用不同浓度的 IMID 来那度胺（Lenalidomide）或 CELMoDs 伊贝度胺（Iberdomide）和阿瓦度胺（Avadomide）处理（已知这些药物可诱导 IKZF1 和 IKZF3 降解）。

过夜孵育后，用 10µL 补充的 4X 裂解缓冲液 #4 在室温下轻轻振荡裂解细胞 30 分钟。随后，将 16µL 裂解物转移至 384 孔低体积白色微孔板，加入 4µL HTRF 总 IKZF1 检测抗体。另取 4µL 裂解物（补充 12µL 稀释液 #8）转移至微孔板，使用 α- 微管蛋白内参细胞试剂盒（64ATUBPET/G/H）检测 α- 微管蛋白水平。过夜孵育后记录 HTRF 信号。

三种化合物均诱导 IKZF1 蛋白表达水平呈剂量依赖性降低，而 α- 微管蛋白表达水平和 ATP 水平如预期保持稳定。

结果表明，与来那度胺相比，伊贝度胺和阿瓦度胺诱导 IKZF1 降解的效力更高（DC50 * 分别为 10nM 和 64nM，降解率分别为 81% 和 88%；来那度胺的 DC50 为 110nM，降解率为 61%），与 Fuchs 等人（《Blood Reviews》，2023 年）的文献描述一致。

*DC50 指 50% 靶蛋白被降解时的降解剂浓度。

CELMoDs 对总 IKZF1 的调节由泛素 - 蛋白酶体系统介导

将 Ramos 细胞接种于 96 孔培养板（50,000 个细胞 / 30µL / 孔），并用不同浓度的 CELMoD 阿瓦度胺处理 4 小时或 24 小时。在添加阿瓦度胺前 1 小时，加入或不加入 1µM 蛋白酶体抑制剂环氧霉素（epoxomicin）。

处理后，用 10µL 补充的 4X 裂解缓冲液 #4 在室温下轻轻振荡裂解细胞 30 分钟。随后，将 16µL 裂解物转移至 384 孔低体积白色微孔板，加入 4µL HTRF 总 IKZF1 检测抗体。另取 4µL 裂解物（补充 12µL 稀释液 #8）转移至微孔板，使用 α- 微管蛋白内参细胞试剂盒检测 α- 微管蛋白水平。过夜孵育后记录 HTRF 信号。

CELMoD 阿瓦度胺诱导 IKZF1 蛋白水平呈剂量依赖性降低，4 小时和 24 小时的 DC50 * 分别为 107nM 和 64nM。此外，蛋白酶体活性抑制剂环氧霉素可阻止阿瓦度胺诱导的 IKZF1 降解。这一结果明确表明，阿瓦度胺诱导的 IKZF1 降解由泛素 - 蛋白酶体系统介导。用来那度胺（IMID）或伊贝度胺（CELMoD）处理细胞时也获得了类似数据（未显示）。

使用 IMID 和 CELMoDs 在 Ramos 细胞中调节 HTRF 总 IKZF1 与 IKZF3 的比较

将 Ramos 细胞接种于 96 孔培养板（50,000 个细胞 / 30µL / 孔），并用不同浓度的 IMID 来那度胺或 CELMoDs 伊贝度胺和阿瓦度胺处理（已知这些药物可诱导 IKZF1 和 IKZF3 降解）。

过夜孵育后，用 10µL 补充的 4X 裂解缓冲液 #4 在室温下轻轻振荡裂解细胞 30 分钟。随后，将 16µL 裂解物转移至 384 孔低体积白色微孔板，加入 4µL 总 IKZF1 或总 IKZF3 检测抗体。过夜孵育后记录 HTRF 信号。

三种化合物均诱导 IKZF1 和 IKZF3 蛋白表达水平呈剂量依赖性降低，而 α- 微管蛋白表达水平和 ATP 水平如预期保持稳定（未显示）。结果表明，来那度胺、伊贝度胺和阿瓦度胺诱导 IKZF1 或 IKZF3 降解的效力相当。

分子胶降解剂	E3 连接酶	蛋白靶标	DC50（nM）	降解率
来那度胺（IMID）	CRBN	IKZF1	110	61%
		IKZF3	76	74%
伊贝度胺（CELMoD）		IKZF1	10	81%
		IKZF3	6	88%
阿瓦度胺（CELMoD）		IKZF1	64	88%
		IKZF3	29	92%

HTRF 总 IKZF1 检测的特异性和选择性

在 T175 培养瓶中，用人类 IKZF1、人类 IKZF3 质粒转染 HAP1 细胞，孵育 24 小时。移除培养基后，用 3mL 补充的 1X 裂解缓冲液 #4 在室温下轻轻振荡裂解细胞 30 分钟。

使用 HTRF 总 IKZF1 试剂盒评估 IKZF1 表达水平：简要来说，将 16µL 细胞裂解物转移至低体积白色微孔板，加入 4µL 预混合的 HTRF 检测试剂，室温过夜孵育后记录 HTRF 信号。

与野生型 HAP1 细胞相比，HTRF 总 IKZF1 检测可有效检测转染 IKZF1 的 HAP1 细胞中的 IKZF1。在转染 IKZF3 的细胞中未检测到信号，表明 HTRF 总 IKZF1 试剂盒具有特异性和选择性。

在多种人和小鼠细胞系中的验证

将悬浮细胞系 MOLT-4（T 淋巴母细胞）、Jurkat（T 淋巴细胞）、THP-1（急性单核细胞白血病）、MV-4-11（B 型粒单核细胞白血病）、Ramos（B 淋巴细胞）和 Raji（B 淋巴母细胞样）接种于 96 孔板，用 10µL 补充的 4X 裂解缓冲液 #4 在室温下轻轻振荡裂解 30 分钟（按悬浮细胞流程操作）。

将贴壁细胞系 RAW 264.7（小鼠巨噬细胞）接种于 96 孔培养板，在 37°C、5% CO₂条件下孵育 24 小时。移除培养基后，用 50µL 补充的 1X 裂解缓冲液 #4 在室温下轻轻振荡裂解 30 分钟。

使用 HTRF 总 IKZF1 试剂盒评估 IKZF1 表达水平：简要来说，将 16µL 细胞裂解物转移至低体积白色微孔板，加入 4µL 预混合的 HTRF 检测试剂，室温过夜孵育后记录 HTRF 信号。虚线对应非特异性 HTRF 信号。注意：预先优化了细胞密度，以确保 HTRF 检测在试剂盒的动态范围内（数据显示为 100,000 个细胞 / 孔）。

HTRF 总 IKZF1 检测可有效检测多种细胞模型中内源性 IKZF1 的表达（这些细胞模型中该蛋白的表达水平不同）。

HTRF 与蛋白质印迹法检测总 IKZF1 的灵敏度比较

在 T175 培养瓶中，将 Ramos 细胞在完全培养基中于 37°C、5% CO₂条件下培养。移除培养基后，用 3mL 补充的 1X 裂解缓冲液 #4 在室温下轻轻振荡裂解 30 分钟。

用补充的 1X 裂解缓冲液 #4 对细胞裂解物进行系列稀释，将 16µL 各稀释液转移至 384 孔小体积微孔板，加入 4µL HTRF 总 IKZF1 检测抗体，过夜孵育后记录 HTRF 信号。

上样等量裂解物进行凝胶电泳，以直接比较 HTRF 与蛋白质印迹法的检测效果。

在此条件下，HTRF 总 IKZF1 检测的灵敏度是蛋白质印迹法的 32 倍。

简化通路

IKZF1 信号通路

Ikaros 锌指转录因子是造血细胞谱系发育相关基因程序的重要调节因子。它们招募不同的辅因子，并与靶基因位点或染色质重塑复合物相互作用。Ikaros 通过在不同细胞类型中作为转录抑制因子或激活因子，介导不同的转录结果。

规格

其他规格

应用：细胞信号传导
品牌：HTRF
检测方式：HTRF
分子修饰：总蛋白
产品类别：试剂盒
样本体积：16 µL
运输条件：干冰运输
靶标类别：磷蛋白
技术：TR-FRET（时间分辨荧光共振能量转移）
单位规格：500 次检测

没有数据

货号：64IKZF1TPEG

一键复制

参考价格 ¥ 29723.99

产品规格

1盒/500测试￥29723.99

参考货期：3-4周

选择数量

当前规格1件起购

加入购物车询价