HTRF PD1/PD-L1 BIND. KIT - 10K PTS PD1/PD-L1蛋白结合检测试剂盒 -10,000测试

产品概述

程序性细胞死亡蛋白1（PD1）是一种调节T细胞应答的免疫检查点受体。其配体——程序性死亡配体1（PD-L1）通常在肿瘤细胞表面过表达。当PD1与PD-L1结合时，T细胞应答受到抑制，从而导致肿瘤免疫逃逸。阻断PD1/PD-L1复合物形成的检查点抑制剂在癌症免疫治疗领域正引起广泛关注。

相较于其他技术，HTRF（均相时间分辨荧光）检测方案具有诸多优势：

• 均相“加样-读取”模式

• 无需洗涤步骤

• 背景信号低

• 可直接从96或384孔微板小型化至384孔低容量及1536孔等高密度检测规格

• 信号稳定，为读取时间或检测规模提供灵活的操作窗口

工作原理

检测原理
PD1/PD-L1结合检测试剂盒包含带标签的人源重组免疫检查点配对蛋白（PD1和PD-L1）以及用于HTRF检测的标记抗标签试剂。在无抑制剂的情况下，PD1与PD-L1结合，各检测试剂与其对应标签蛋白的结合产生HTRF信号。在待测化合物、标准品或阻断PD1/PD-L1相互作用的抗体存在时，HTRF信号随之降低。

检测方案
本试剂盒可在96孔或384孔低容量白色微孔板（终体积20 µL）中运行。操作流程如下：将样品或标准品直接分装至检测板中，随后加入带标签的PD1和PD-L1蛋白，接着分装HTRF检测试剂。HTRF荧光基团标记的试剂可预先混合并在单个分装步骤中添加。整个过程无需洗涤步骤。该方案还可通过按比例调整各添加体积，实现进一步的小型化或放大化。

检测验证

阻断抗体及小分子的抑制效应
分别测试了三种抗体和两种已知可抑制PD1/PD-L1相互作用的小分子的抑制效应。两种抗PD1抗体（帕博利珠单抗，pembrolizumab和纳武利尤单抗，nivolumab）均显示出对相互作用的抑制，IC₅₀值分别为2.0 nM和2.4 nM。抗PD-L1抗体（阿替利珠单抗，atezolizumab）同样破坏了该相互作用，IC₅₀为3.9 nM。在此检测条件下，两种小分子PD1/PD-L1抑制剂1和3的IC₅₀分别为177 nM和146 nM。

PD1/PD-L1标准品的抑制效应
将试剂盒中提供的PD1/PD-L1标准品储备液进行5倍梯度稀释，制备8点剂量响应曲线。按照检测方案所述，将标准品分装至检测板中，随后加入带标签的PD1和PD-L1蛋白，接着分装HTRF检测试剂。图中数据表明PD1/PD-L1相互作用受到抑制，IC₅₀为3.8 nM。

技术规格